牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化
우분지간균융합기인hsp65-esat6적원핵표체급산물적순화
Prokaryotic expression of the fusion gene hsp65-esat6 of Mycobacterium bovis and purification of the expressed protein
  • 万方数据
    中国兽医科学 중국수의과학
    VETERINARY SCIENCE IN CHINA
    2007年 3期 223-226 ,共4页

    迟磊%刘思国%宫强%王春来%赵昆%王勇%刘建东%刘慧芳%周媛媛%常月红%云孟克%赵福广

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    以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1 mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western-blot分析该融合蛋白的免疫活性.结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达.表达的融合蛋白裂解为两部分,即58 ku和30 ku,二者相加与预测大小88 ku相符.纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应.
    이우분지간균Vallee Ⅲ주기인조DNA위모판확증hsp65화esat6기인,채용중첩연신전접기술(SOE)획득료융합기인hsp65-esat6,장hsp65-esat6련접도원핵표체재체pET32a(+)상,구건중조질립pET65-E6,장기전화도대장간균BL21(DE3)감수태세포중,이IPTG유도(종농도위1 mmol/L),표체산물진행SDS-PAGE분석.이Ni2+친화층석주순화표체적융합단백화Western-blot분석해융합단백적면역활성.결과표명:Hsp65-ESAT6융합단백이포함체형식표체.표체적융합단백렬해위량부분,즉58 ku화30 ku,이자상가여예측대소88 ku상부.순화적융합단백능여항우분지간균양성혈청발생반응.
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