中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2008年
1期
1-4
,共4页
颜江华%王生育%王阶平%王勇军%黄志平%王臻
顏江華%王生育%王階平%王勇軍%黃誌平%王臻
안강화%왕생육%왕계평%왕용군%황지평%왕진
hu3D3VH%tTF%血栓%肺癌
hu3D3VH%tTF%血栓%肺癌
hu3D3VH%tTF%혈전%폐암
目的 制备一种用于肺癌血管靶向栓塞治疗的融合蛋白hu3D3VH-tTF,并鉴定其生物学活性.方法 利用重叠PCR技术构建tTF与hu3D3VH的融合基因,克隆至表达载体pET22 b(+ ),在E.coli BL21(DE3)中表达,镍亲和色谱柱纯化目的 蛋白.ELISA检测融合蛋白hu3D3VH组分与肺腺癌细胞A549选择性结合活性,凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白 tTF组分的促凝血活性.结果 获得序列正确的hu3D3VH/tTF /pET22 b(+)重组子,融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达.纯化后的融合蛋白与肺腺癌细胞A549具有选择性结合活性,并能活化FⅩ、有效促发血液凝固. 结论成功构建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,hu3D3VH/tTF 融合蛋白具有hu3D3VH的选择性结合能力同时具有TF的促凝血活性,为开展选择性肺肿瘤血管血栓性栓塞研究奠定了基础.
目的 製備一種用于肺癌血管靶嚮栓塞治療的融閤蛋白hu3D3VH-tTF,併鑒定其生物學活性.方法 利用重疊PCR技術構建tTF與hu3D3VH的融閤基因,剋隆至錶達載體pET22 b(+ ),在E.coli BL21(DE3)中錶達,鎳親和色譜柱純化目的 蛋白.ELISA檢測融閤蛋白hu3D3VH組分與肺腺癌細胞A549選擇性結閤活性,凝血實驗和FⅩ活化實驗鑒定融閤蛋白 tTF組分的促凝血活性.結果 穫得序列正確的hu3D3VH/tTF /pET22 b(+)重組子,融閤蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效錶達.純化後的融閤蛋白與肺腺癌細胞A549具有選擇性結閤活性,併能活化FⅩ、有效促髮血液凝固. 結論成功構建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重組子,hu3D3VH/tTF 融閤蛋白具有hu3D3VH的選擇性結閤能力同時具有TF的促凝血活性,為開展選擇性肺腫瘤血管血栓性栓塞研究奠定瞭基礎.
목적 제비일충용우폐암혈관파향전새치료적융합단백hu3D3VH-tTF,병감정기생물학활성.방법 이용중첩PCR기술구건tTF여hu3D3VH적융합기인,극륭지표체재체pET22 b(+ ),재E.coli BL21(DE3)중표체,얼친화색보주순화목적 단백.ELISA검측융합단백hu3D3VH조분여폐선암세포A549선택성결합활성,응혈실험화FⅩ활화실험감정융합단백 tTF조분적촉응혈활성.결과 획득서렬정학적hu3D3VH/tTF /pET22 b(+)중조자,융합단백재E.coli BL21(DE3)중고효표체.순화후적융합단백여폐선암세포A549구유선택성결합활성,병능활화FⅩ、유효촉발혈액응고. 결론성공구건hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)중조자,hu3D3VH/tTF 융합단백구유hu3D3VH적선택성결합능력동시구유TF적촉응혈활성,위개전선택성폐종류혈관혈전성전새연구전정료기출.
