高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2008年
5期
543-549
,共7页
韩新锋%程安春%汪铭书%刘晓东%卢菲%黎敏%车茜
韓新鋒%程安春%汪銘書%劉曉東%盧菲%黎敏%車茜
한신봉%정안춘%왕명서%류효동%로비%려민%차천
小鹅瘟病毒%VP3基因%真核表达质粒%基因免疫%中和抗体
小鵝瘟病毒%VP3基因%真覈錶達質粒%基因免疫%中和抗體
소아온병독%VP3기인%진핵표체질립%기인면역%중화항체
PER扩增小鹅瘟病毒(IHPV)CHv株VP3基因并克隆入pMD 18-T-Simple载体,亚克隆正向插入到真核表达质粒pcDNA3.1(+)CMV启动子下游多克隆位点,经PCR和HindⅢ与BamH Ⅰ双酶切鉴定表明成功构建了GPV VP3基因疫苗(pcDNA3.1-GPV-VP3).该疫苗以200μg/只肌注免疫Balb/c小鼠和鹅,同时分别设肌注PBS和pcDNA3.1(+)作为对照,于免疫后第30、45、60、75、90、105天应用鸭胚原代成纤维细胞(DEF)进行微量中和试验检测小鼠和鹅血清抗100 TCID50 GPV的抗体效价.结果表明,pcDNA3.1.GPV-VP3免疫小鼠第30天可检测到抗GPV的中和抗体,抗体效价缓慢上升至90天达到高峰(平均1:135.8)后下降,105天仍高于75天;免疫鹅的中和抗体效价呈现与小鼠类似的规律,第90天达到高峰(平均1:98.5).因此,peDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性,肌注免疫小鼠和鹅后能够诱发产生抗GPV的中和抗体,有进一步开展临床研究和应用的前景.
PER擴增小鵝瘟病毒(IHPV)CHv株VP3基因併剋隆入pMD 18-T-Simple載體,亞剋隆正嚮插入到真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)CMV啟動子下遊多剋隆位點,經PCR和HindⅢ與BamH Ⅰ雙酶切鑒定錶明成功構建瞭GPV VP3基因疫苗(pcDNA3.1-GPV-VP3).該疫苗以200μg/隻肌註免疫Balb/c小鼠和鵝,同時分彆設肌註PBS和pcDNA3.1(+)作為對照,于免疫後第30、45、60、75、90、105天應用鴨胚原代成纖維細胞(DEF)進行微量中和試驗檢測小鼠和鵝血清抗100 TCID50 GPV的抗體效價.結果錶明,pcDNA3.1.GPV-VP3免疫小鼠第30天可檢測到抗GPV的中和抗體,抗體效價緩慢上升至90天達到高峰(平均1:135.8)後下降,105天仍高于75天;免疫鵝的中和抗體效價呈現與小鼠類似的規律,第90天達到高峰(平均1:98.5).因此,peDNA3.1-GPV-VP3具有良好的免疫原性,肌註免疫小鼠和鵝後能夠誘髮產生抗GPV的中和抗體,有進一步開展臨床研究和應用的前景.
PER확증소아온병독(IHPV)CHv주VP3기인병극륭입pMD 18-T-Simple재체,아극륭정향삽입도진핵표체질립pcDNA3.1(+)CMV계동자하유다극륭위점,경PCR화HindⅢ여BamH Ⅰ쌍매절감정표명성공구건료GPV VP3기인역묘(pcDNA3.1-GPV-VP3).해역묘이200μg/지기주면역Balb/c소서화아,동시분별설기주PBS화pcDNA3.1(+)작위대조,우면역후제30、45、60、75、90、105천응용압배원대성섬유세포(DEF)진행미량중화시험검측소서화아혈청항100 TCID50 GPV적항체효개.결과표명,pcDNA3.1.GPV-VP3면역소서제30천가검측도항GPV적중화항체,항체효개완만상승지90천체도고봉(평균1:135.8)후하강,105천잉고우75천;면역아적중화항체효개정현여소서유사적규률,제90천체도고봉(평균1:98.5).인차,peDNA3.1-GPV-VP3구유량호적면역원성,기주면역소서화아후능구유발산생항GPV적중화항체,유진일보개전림상연구화응용적전경.
