复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
3期
295-300
,共6页
王虹军%刘瑞卿%金瑞良%曹健%徐胜凤%王洪海
王虹軍%劉瑞卿%金瑞良%曹健%徐勝鳳%王洪海
왕홍군%류서경%금서량%조건%서성봉%왕홍해
结核分枝杆菌%高丝氨酸激酶%L-高丝氨酸%ATP%NADH
結覈分枝桿菌%高絲氨痠激酶%L-高絲氨痠%ATP%NADH
결핵분지간균%고사안산격매%L-고사안산%ATP%NADH
采用PCR方法克隆到结核分枝杆菌H37Rv的高丝氨酸激酶基因thrB,将其连接到pET-28a(+)表达载体中,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中经丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到高效表达.用Ni·NTA His·Bind亲和层析柱对表达的活性重组蛋白进行了分离纯化,并对其酶学性质进行了研究.结果表明:重组结核分枝杆菌高丝氨酸激酶能以L-高丝氨酸和ATP为底物催化L-高丝氨酸生成O-磷酰-L-高丝氨酸,该酶的比活力为2.946 U/mg,对底物L-高丝氨酸和ATP的米氏常数分别为2.303 1 mmol/L和2.342 9 mmol/L.
採用PCR方法剋隆到結覈分枝桿菌H37Rv的高絲氨痠激酶基因thrB,將其連接到pET-28a(+)錶達載體中,在大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中經丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導得到高效錶達.用Ni·NTA His·Bind親和層析柱對錶達的活性重組蛋白進行瞭分離純化,併對其酶學性質進行瞭研究.結果錶明:重組結覈分枝桿菌高絲氨痠激酶能以L-高絲氨痠和ATP為底物催化L-高絲氨痠生成O-燐酰-L-高絲氨痠,該酶的比活力為2.946 U/mg,對底物L-高絲氨痠和ATP的米氏常數分彆為2.303 1 mmol/L和2.342 9 mmol/L.
채용PCR방법극륭도결핵분지간균H37Rv적고사안산격매기인thrB,장기련접도pET-28a(+)표체재체중,재대장간균E.coli BL21(DE3)중경병기류대반유당감(IPTG)유도득도고효표체.용Ni·NTA His·Bind친화층석주대표체적활성중조단백진행료분리순화,병대기매학성질진행료연구.결과표명:중조결핵분지간균고사안산격매능이L-고사안산화ATP위저물최화L-고사안산생성O-린선-L-고사안산,해매적비활력위2.946 U/mg,대저물L-고사안산화ATP적미씨상수분별위2.303 1 mmol/L화2.342 9 mmol/L.
