CAJ | 학술논문

背景:研究发现通过流式分选的SP肿瘤干细胞具有干细胞功能,提示可用于检测表面标志未知的肿瘤干细胞.目的:观察慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对乳腺癌细胞系MCF-7中SP肿瘤干细胞生物学特性及亚群分布的影响.设计、时间及地点:细胞学基因检测水平体外观察,于2007-06/2008-07在南京医科大学第一附属医院普外科实验室完成.材料:MCF-7细胞株由上海细胞生物学研究所馈赠,GFP-MCF-7细胞株由江苏省人民医院普外实验室保存.方法:取MCF-7与GFP-MCF-7细胞株,加入含10%小牛血清的高糖DMEM培养液,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度恒温箱中培养,生长至80%～90%融合时消化传代,取处于对数生长期的两种细胞进行实验.主要观察指标:利用流式细胞技术检测转染前后细胞中SP肿瘤干细胞的比例,运用Percoll不连续密度梯度法分离转染前后富集SP肿瘤干细胞的亚群,平板克隆实验测定各亚群的克隆形成率,观察比较转染前后细胞生长曲线、骨桥蛋白的表达水平.结果:MCF-7与GFP-MCF-7细胞中SP肿瘤干细胞比例分别为2.79%和2.73%,转染前后差异无显著性意义(t=2.184,P > 0.05).经Percoll分选,MCF-7与GFP-MCF-7细胞均分为5层,其中GFP-MCF-7第4亚群中明显富集SP肿瘤干细胞,且克隆形成率最高(t=3.415,P < 0.01).转染前后细胞生长曲线无明显变化,且骨桥蛋白的表达水平基本相似(t=2.562,P > 0.05).结论:慢病毒转染绿色荧光蛋白对MCF-7中的SP肿瘤干细胞比例、亚群分布、细胞生物学特性无明显影响,且Percoll不连续密度梯度法富集效果显著.GFP-MCF-7细胞株可用于乳腺癌肿瘤干细胞转移动物模型的构建等实验.
배경:연구발현통과류식분선적SP종류간세포구유간세포공능,제시가용우검측표면표지미지적종류간세포.목적:관찰만병독전염록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)대유선암세포계MCF-7중SP종류간세포생물학특성급아군분포적영향.설계、시간급지점:세포학기인검측수평체외관찰,우2007-06/2008-07재남경의과대학제일부속의원보외과실험실완성.재료:MCF-7세포주유상해세포생물학연구소궤증,GFP-MCF-7세포주유강소성인민의원보외실험실보존.방법:취MCF-7여GFP-MCF-7세포주,가입함10%소우혈청적고당DMEM배양액,재37 ℃、체적분수위0.05적CO2포화습도항온상중배양,생장지80%～90%융합시소화전대,취처우대수생장기적량충세포진행실험.주요관찰지표:이용류식세포기술검측전염전후세포중SP종류간세포적비례,운용Percoll불련속밀도제도법분리전염전후부집SP종류간세포적아군,평판극륭실험측정각아군적극륭형성솔,관찰비교전염전후세포생장곡선、골교단백적표체수평.결과:MCF-7여GFP-MCF-7세포중SP종류간세포비례분별위2.79%화2.73%,전염전후차이무현저성의의(t=2.184,P > 0.05).경Percoll분선,MCF-7여GFP-MCF-7세포균분위5층,기중GFP-MCF-7제4아군중명현부집SP종류간세포,차극륭형성솔최고(t=3.415,P < 0.01).전염전후세포생장곡선무명현변화,차골교단백적표체수평기본상사(t=2.562,P > 0.05).결론:만병독전염록색형광단백대MCF-7중적SP종류간세포비례、아군분포、세포생물학특성무명현영향,차Percoll불련속밀도제도법부집효과현저.GFP-MCF-7세포주가용우유선암종류간세포전이동물모형적구건등실험.