CAJ | 학술논문

背景:PDX1是决定胰岛β细胞功能的关键因子,应用穿膜蛋白TAT将PDX1蛋白导入细胞内,若能发挥诱导分化作用将使干细胞治疗糖尿病向临床应用更进一步.目的:观察TAT-PDX1融合蛋白诱导人胎肝间充质干细胞向胰岛B细胞分化的能力.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-05/2008-03在郧阳医学院附属太和医院湖北省胚胎干细胞研究重点实验室完成.材料:流产胎儿来源于肝功能正常、HBsAg(-)的健康产妇,TAT-PDX1融合蛋白由美国佛罗里达大学医学院唐东启博上惠赠.方法:采用贴壁法体外分离培养人胎肝间充质干细胞,传至第3代加入20 mol/L TAT-PDX1融合蛋白诱导,分别于第4,6,8,10天向诱导细胞中加入含葡萄糖的DMEM/F12培养基.主要观察指标:诱导后细胞形态变化及双硫腙染色结果,RT-PCR检测胰岛β细胞特异基因的表达,放射免疫法测定胰岛素累积分泌量.结果:人胎肝间充质干细胞易于体外分离和扩增,加入TAT-PDX1融合蛋白诱导后细胞由梭形逐渐变圆,并形成胰岛样细胞团,双硫腙染色呈棕红色.诱导第4,6,8,10天细胞序贯表达胰岛β细胞特异基因,NeuroD基因最先出现,随后消失,Nkx2.2,Pax4,Nkx6.1,ISL-1基因随后依次出现.诱导后胰岛素累积分泌量逐渐增加,葡萄糖刺激后2～4周细胞胰岛素基础分泌量和刺激后胰岛素分泌量均显著增加,且可以维持在较高水平.结论:TAT-PDX1融合蛋白能诱导人胎肝间充质干细胞向胰岛β细胞分化.
배경:PDX1시결정이도β세포공능적관건인자,응용천막단백TAT장PDX1단백도입세포내,약능발휘유도분화작용장사간세포치료당뇨병향림상응용경진일보.목적:관찰TAT-PDX1융합단백유도인태간간충질간세포향이도B세포분화적능력.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-05/2008-03재운양의학원부속태화의원호북성배태간세포연구중점실험실완성.재료:유산태인래원우간공능정상、HBsAg(-)적건강산부,TAT-PDX1융합단백유미국불라리체대학의학원당동계박상혜증.방법:채용첩벽법체외분리배양인태간간충질간세포,전지제3대가입20 mol/L TAT-PDX1융합단백유도,분별우제4,6,8,10천향유도세포중가입함포도당적DMEM/F12배양기.주요관찰지표:유도후세포형태변화급쌍류종염색결과,RT-PCR검측이도β세포특이기인적표체,방사면역법측정이도소루적분비량.결과:인태간간충질간세포역우체외분리화확증,가입TAT-PDX1융합단백유도후세포유사형축점변원,병형성이도양세포단,쌍류종염색정종홍색.유도제4,6,8,10천세포서관표체이도β세포특이기인,NeuroD기인최선출현,수후소실,Nkx2.2,Pax4,Nkx6.1,ISL-1기인수후의차출현.유도후이도소루적분비량축점증가,포도당자격후2～4주세포이도소기출분비량화자격후이도소분비량균현저증가,차가이유지재교고수평.결론:TAT-PDX1융합단백능유도인태간간충질간세포향이도β세포분화.