细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
5期
454-456
,共3页
包红霞%吴春铃%李淑珍%唐晓波%褚晓杰%王爽%张家宁%朱大岭
包紅霞%吳春鈴%李淑珍%唐曉波%褚曉傑%王爽%張傢寧%硃大嶺
포홍하%오춘령%리숙진%당효파%저효걸%왕상%장가저%주대령
CD20%原核表达%融合蛋白%抗体制备
CD20%原覈錶達%融閤蛋白%抗體製備
CD20%원핵표체%융합단백%항체제비
目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:以人单核细胞cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX- 4T-1-CD20 (即CD20-GST) 和pET-32a-CD20(即CD20-His).以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.结果:CD20-GST 和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20 mAb与CD20蛋白具有良好的反应性.结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础.
目的:製備CD20融閤蛋白及製備CD20的單剋隆抗體(mAb),併對其進行特性鑒定.方法:以人單覈細胞cDNA文庫為模闆,構建重組錶達質粒pGEX- 4T-1-CD20 (即CD20-GST) 和pET-32a-CD20(即CD20-His).以融閤蛋白CD20-GST為免疫源免疫BALB/c雌性小鼠製備(mAb),用間接ELISA法測定抗體的效價,Western blot、免疫熒光鑒定其特異性及免疫組化染色法對mAb相應的抗原進行組織定位.結果:CD20-GST 和CD20-His蛋白在大腸桿菌中可高效錶達,經純化後可穫得高純度的CD20蛋白,經細胞融閤得到1株穩定分泌CD20抗體的雜交瘤細胞株,Western blot和免疫組化顯示抗CD20 mAb與CD20蛋白具有良好的反應性.結論:成功製備高純度CD20蛋白併以此為抗原製備瞭1株能夠穩定分泌抗人CD20的鼠mAb的雜交瘤細胞株BD11F4,為進一步研究CD20對非霍奇金淋巴瘤的診斷治療提供基礎.
목적:제비CD20융합단백급제비CD20적단극륭항체(mAb),병대기진행특성감정.방법:이인단핵세포cDNA문고위모판,구건중조표체질립pGEX- 4T-1-CD20 (즉CD20-GST) 화pET-32a-CD20(즉CD20-His).이융합단백CD20-GST위면역원면역BALB/c자성소서제비(mAb),용간접ELISA법측정항체적효개,Western blot、면역형광감정기특이성급면역조화염색법대mAb상응적항원진행조직정위.결과:CD20-GST 화CD20-His단백재대장간균중가고효표체,경순화후가획득고순도적CD20단백,경세포융합득도1주은정분비CD20항체적잡교류세포주,Western blot화면역조화현시항CD20 mAb여CD20단백구유량호적반응성.결론:성공제비고순도CD20단백병이차위항원제비료1주능구은정분비항인CD20적서mAb적잡교류세포주BD11F4,위진일보연구CD20대비곽기금림파류적진단치료제공기출.
