CAJ | 학술논문

目的:构建天然人源IgG Fab噬菌体抗体库并分析来源于健康人外周血B淋巴细胞的抗体基因可变区的多样性及优势选择.方法:以DNA重组技术从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增出全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入噬菌体载体pFabICN相应位置,构建天然人源免疫球蛋白G基因文库;进一步从抗体库中随机挑选克隆,获得重轻链基因进行核苷酸序列测定并利用IgBLAST 数据库分析抗体基因可变区的同源家族.结果:从4×108库容的天然人源IgG Fab噬菌体抗体库中随机挑选克隆,对其中32个轻链及重链Fd基因插入正确的克隆进行核苷酸序列测定和氨基酸序列的推算,获得29条彼此完全不同的Fd重链基因及轻链基因.以IgBLAST 数据库比对分析显示29条重链基因的V区分别属于VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)和VH7(3.4%)基因家族.29条轻链基因分别属于Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)基因家族和Vλ1(11.5%)基因家族.结论:以300份健康人外周血淋巴细胞的抗体基因构建的天然人源IgG Fab噬菌体抗体库基因多样性良好,重链VH3基因家族存在优势表达.
목적:구건천연인원IgG Fab서균체항체고병분석래원우건강인외주혈B림파세포적항체기인가변구적다양성급우세선택.방법:이DNA중조기술종300명건강지원자적외주혈림파세포중확증출전투인항체경련급중련Fd기인,분별삽입서균체재체pFabICN상응위치,구건천연인원면역구단백G기인문고;진일보종항체고중수궤도선극륭,획득중경련기인진행핵감산서렬측정병이용IgBLAST 수거고분석항체기인가변구적동원가족.결과:종4×108고용적천연인원IgG Fab서균체항체고중수궤도선극륭,대기중32개경련급중련Fd기인삽입정학적극륭진행핵감산서렬측정화안기산서렬적추산,획득29조피차완전불동적Fd중련기인급경련기인.이IgBLAST 수거고비대분석현시29조중련기인적V구분별속우VH3(72.4%),VH1(10.3%),VH4(6.9%),VH5(6.9%)화VH7(3.4%)기인가족.29조경련기인분별속우Vκ1(44.8%),Vκ2(15.4%),Vκ3(11.5%),Vκ4(23.1%)기인가족화Vλ1(11.5%)기인가족.결론:이300빈건강인외주혈림파세포적항체기인구건적천연인원IgG Fab서균체항체고기인다양성량호,중련VH3기인가족존재우세표체.