南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
11期
2427-2431
,共5页
何晓燕%陈俊霞%欧阳溪%张政%彭惠民
何曉燕%陳俊霞%歐暘溪%張政%彭惠民
하효연%진준하%구양계%장정%팽혜민
微RNA%let-7a%肺癌%k-Ras%基因表达
微RNA%let-7a%肺癌%k-Ras%基因錶達
미RNA%let-7a%폐암%k-Ras%기인표체
目的 探讨let-7a介导的基因表达调控在肺癌形成中的作用.方法 依据miRBase数据库中hsa-let-7a序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建重组质粒pGenesil-1et-7a,同时设计并构建一个阴性对照质粒pGenesil-control.将pGenesil-let-7a及pGenesil-control转染肺癌A549细胞,经G418筛选.建立稳定表达let-7a-GFP及control-GFP的细胞株.采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学检测k-Ras表达的差异.结果 经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的A549细胞和稳定表达pGenesil-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-let-7a的A549细胞中,细胞生长明显减慢,k-Ras的蛋白表达明显降低,而k-Ras的mRNA水平无明显变化.结论 let-7a在翻译水平抑制了k-Ras的表达,并对细胞生长具有显著的抑制作用.
目的 探討let-7a介導的基因錶達調控在肺癌形成中的作用.方法 依據miRBase數據庫中hsa-let-7a序列,設計兩條寡覈苷痠片段,退火處理後剋隆至pGenesil-1質粒,構建重組質粒pGenesil-1et-7a,同時設計併構建一箇陰性對照質粒pGenesil-control.將pGenesil-let-7a及pGenesil-control轉染肺癌A549細胞,經G418篩選.建立穩定錶達let-7a-GFP及control-GFP的細胞株.採用MTT比色法檢測活細胞數併繪製生長麯線;半定量RT-PCR、Western blotting及免疫細胞化學檢測k-Ras錶達的差異.結果 經測序證實重組質粒構建成功,與未處理的A549細胞和穩定錶達pGenesil-control的細胞相比,在穩定錶達pGenesil-let-7a的A549細胞中,細胞生長明顯減慢,k-Ras的蛋白錶達明顯降低,而k-Ras的mRNA水平無明顯變化.結論 let-7a在翻譯水平抑製瞭k-Ras的錶達,併對細胞生長具有顯著的抑製作用.
목적 탐토let-7a개도적기인표체조공재폐암형성중적작용.방법 의거miRBase수거고중hsa-let-7a서렬,설계량조과핵감산편단,퇴화처리후극륭지pGenesil-1질립,구건중조질립pGenesil-1et-7a,동시설계병구건일개음성대조질립pGenesil-control.장pGenesil-let-7a급pGenesil-control전염폐암A549세포,경G418사선.건립은정표체let-7a-GFP급control-GFP적세포주.채용MTT비색법검측활세포수병회제생장곡선;반정량RT-PCR、Western blotting급면역세포화학검측k-Ras표체적차이.결과 경측서증실중조질립구건성공,여미처리적A549세포화은정표체pGenesil-control적세포상비,재은정표체pGenesil-let-7a적A549세포중,세포생장명현감만,k-Ras적단백표체명현강저,이k-Ras적mRNA수평무명현변화.결론 let-7a재번역수평억제료k-Ras적표체,병대세포생장구유현저적억제작용.
