中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2011年
5期
576-581
,共6页
赵仲艳%韦映梅%黎祥喷%吕瑞妍%肖颂华%刘中霖%邢诒刚%刘军
趙仲豔%韋映梅%黎祥噴%呂瑞妍%肖頌華%劉中霖%邢詒剛%劉軍
조중염%위영매%려상분%려서연%초송화%류중림%형이강%류군
人血管内皮细胞生长因子%慢病毒%载体构建%HT22细胞%放射治疗
人血管內皮細胞生長因子%慢病毒%載體構建%HT22細胞%放射治療
인혈관내피세포생장인자%만병독%재체구건%HT22세포%방사치료
摘要:[目的]构建人血管内皮生长因子165 (hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22细胞,并迸一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用.[方法]PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体；通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体；采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞,采用实时RT-PCR及Western Blot检测hVEGF165基因在HT22细胞中的表达情况.进一步对单纯HT22细胞、空质粒转染组以及hVEGF165转染组HT22细胞进行0、5、10 Gy的X线照射,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]hVEGF165基因片段重组到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,酶切后电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与GenBank序列完全一致,转染HT22后hVEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高.而且同各对照组相比,hVEGF165可以降低细胞放疗后的凋亡率.[结论]pCDH-CMV-MCS-EF1 -copGFP-hVEGF165慢病毒表达载体构建成功,其转染HT22细胞后可获得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的表达,hVEGF165具有抗放射所致细胞凋亡的作用.
摘要:[目的]構建人血管內皮生長因子165 (hVEGF165)慢病毒錶達載體pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,併轉染至HT22細胞,併迸一步觀察其對放射線損傷所緻的細胞凋亡的保護作用.[方法]PCR擴增hVEGF165基因,剋隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP載體；通過酶切電泳,菌落PCR初步篩選和測序鑒定構建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重組載體；採用燐痠鈣共轉染法轉染293T細胞包裝製備慢病毒液,併感染HT22細胞,採用實時RT-PCR及Western Blot檢測hVEGF165基因在HT22細胞中的錶達情況.進一步對單純HT22細胞、空質粒轉染組以及hVEGF165轉染組HT22細胞進行0、5、10 Gy的X線照射,流式細胞儀檢測細胞凋亡情況.[結果]hVEGF165基因片段重組到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP載體,酶切後電泳結果顯示均能得到與理論大小相符的片段,測序結果與GenBank序列完全一緻,轉染HT22後hVEGF mRNA及蛋白錶達水平明顯增高.而且同各對照組相比,hVEGF165可以降低細胞放療後的凋亡率.[結論]pCDH-CMV-MCS-EF1 -copGFP-hVEGF165慢病毒錶達載體構建成功,其轉染HT22細胞後可穫得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的錶達,hVEGF165具有抗放射所緻細胞凋亡的作用.
적요:[목적]구건인혈관내피생장인자165 (hVEGF165)만병독표체재체pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,병전염지HT22세포,병병일보관찰기대방사선손상소치적세포조망적보호작용.[방법]PCR확증hVEGF165기인,극륭도pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP재체；통과매절전영,균락PCR초보사선화측서감정구건적pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165중조재체；채용린산개공전염법전염293T세포포장제비만병독액,병감염HT22세포,채용실시RT-PCR급Western Blot검측hVEGF165기인재HT22세포중적표체정황.진일보대단순HT22세포、공질립전염조이급hVEGF165전염조HT22세포진행0、5、10 Gy적X선조사,류식세포의검측세포조망정황.[결과]hVEGF165기인편단중조도pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP재체,매절후전영결과현시균능득도여이론대소상부적편단,측서결과여GenBank서렬완전일치,전염HT22후hVEGF mRNA급단백표체수평명현증고.이차동각대조조상비,hVEGF165가이강저세포방료후적조망솔.[결론]pCDH-CMV-MCS-EF1 -copGFP-hVEGF165만병독표체재체구건성공,기전염HT22세포후가획득고수평hVEGF165 mRNA화단백적표체,hVEGF165구유항방사소치세포조망적작용.
