中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2009年
4期
451-454
,共4页
颜英俊%喻华%周忠华%鲁芳%刘华%乔宁%黄文芳
顏英俊%喻華%週忠華%魯芳%劉華%喬寧%黃文芳
안영준%유화%주충화%로방%류화%교저%황문방
假单胞菌,铜绿%蛋白质类%亚胺培南%抗药性,细菌%突变
假單胞菌,銅綠%蛋白質類%亞胺培南%抗藥性,細菌%突變
가단포균,동록%단백질류%아알배남%항약성,세균%돌변
Pseudomonas aeruginosa%Proteins%lmipenem%Drug resistance,bacterial%Mutation
目的 研究耐哑胺培南(IMP)铜绿假单胞菌(Pa)外膜孔蛋白oprD基因突变方式和突变意义.方法 对来自临床样本的34株耐IMP的Pa用PCR方法直接扩增oprD基因,扩增产物纯化后进行DNA双向序列分析,测得序列在www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST中的BLASTn(序列号:X63152.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)和BLASTx(序列号:NF249649.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)进行DNA序列和氨基酸序列分析,并与标准菌株ATCC27853和2株临床分离IMP敏感Pa比较,分析突变类型和可能影响的oprD外膜蛋白功能域.结果 oprD基因突变率高达92.3%(12/13),突变方式多样(包括点突变、缺失突变、插入突变),导致外膜蛋白oprD L2、L3茎环结构上103、115、127、154、158、170、185、186、189位氨基酸改变和(或)移码突变.发现新的碱基变异位点(1 079、1114、1196、1206、1288、1300、1301 bp)和新的氨基酸突变位点(115、127、154、158、185、189位氨基酸).以上突变在标准菌株ATCC27853和2株临床IMP敏感的Pa中均未检测到.结论 oprD基因发生广泛有意突变,导致L2、L3茎环结构氨基酸改变和(或)移码突变,可能影响oprD与IMP结合,导致本组Pa对IMP耐药.
目的 研究耐啞胺培南(IMP)銅綠假單胞菌(Pa)外膜孔蛋白oprD基因突變方式和突變意義.方法 對來自臨床樣本的34株耐IMP的Pa用PCR方法直接擴增oprD基因,擴增產物純化後進行DNA雙嚮序列分析,測得序列在www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST中的BLASTn(序列號:X63152.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)和BLASTx(序列號:NF249649.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)進行DNA序列和氨基痠序列分析,併與標準菌株ATCC27853和2株臨床分離IMP敏感Pa比較,分析突變類型和可能影響的oprD外膜蛋白功能域.結果 oprD基因突變率高達92.3%(12/13),突變方式多樣(包括點突變、缺失突變、插入突變),導緻外膜蛋白oprD L2、L3莖環結構上103、115、127、154、158、170、185、186、189位氨基痠改變和(或)移碼突變.髮現新的堿基變異位點(1 079、1114、1196、1206、1288、1300、1301 bp)和新的氨基痠突變位點(115、127、154、158、185、189位氨基痠).以上突變在標準菌株ATCC27853和2株臨床IMP敏感的Pa中均未檢測到.結論 oprD基因髮生廣汎有意突變,導緻L2、L3莖環結構氨基痠改變和(或)移碼突變,可能影響oprD與IMP結閤,導緻本組Pa對IMP耐藥.
목적 연구내아알배남(IMP)동록가단포균(Pa)외막공단백oprD기인돌변방식화돌변의의.방법 대래자림상양본적34주내IMP적Pa용PCR방법직접확증oprD기인,확증산물순화후진행DNA쌍향서렬분석,측득서렬재www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST중적BLASTn(서렬호:X63152.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)화BLASTx(서렬호:NF249649.1 Pseudomonas aeruginosa PA01)진행DNA서렬화안기산서렬분석,병여표준균주ATCC27853화2주림상분리IMP민감Pa비교,분석돌변류형화가능영향적oprD외막단백공능역.결과 oprD기인돌변솔고체92.3%(12/13),돌변방식다양(포괄점돌변、결실돌변、삽입돌변),도치외막단백oprD L2、L3경배결구상103、115、127、154、158、170、185、186、189위안기산개변화(혹)이마돌변.발현신적감기변이위점(1 079、1114、1196、1206、1288、1300、1301 bp)화신적안기산돌변위점(115、127、154、158、185、189위안기산).이상돌변재표준균주ATCC27853화2주림상IMP민감적Pa중균미검측도.결론 oprD기인발생엄범유의돌변,도치L2、L3경배결구안기산개변화(혹)이마돌변,가능영향oprD여IMP결합,도치본조Pa대IMP내약.
Objective To study the mutations of outer-membrane porin gerte (oprD) in imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa.Methods The PCR was applied to detect the oprD gene from the 34 clinical imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa.DNA sequence was proceeded to analysis the nuclentide sequence of the oprD gene and the deduced amino acid sequence.To analysis the mutation and the function of the oprD domain,those mutations were compaired with the standard Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 and 2 clinical imipenem-susceptibility isolates.Results oprD gene mutation was wide and diverse.The rate of the mutation was 92.3% (12/13),mutations were concluded dot mutation,deletion mutation and insert mutation,those result in the amino sequence change and frame shift in L2 and L3 loops of outer membrane protein D,hampering the combine of oprD and imipenem.Some new mutations were found.They were 1 079,1 114,1 196,1 206,1 288,1 300,1 301 bases and 115,127,154,158,185,189 aminos.All above mutations were not deteced in ATCC 27853 and 2 clinical imipenem-susoeptibility isolates.Conclusions The wide and diverse mutations in oprD gene result in amino acid change and/or frame shift L2 and L3 loops,hampering the binding of IMP and oprD.Those may result in resistance to imipenem in Pseudomonas aeruginosa.
