高技术通讯
高技術通訊
고기술통신
HIGH TECHNOLOGY LETTERS
2004年
12期
37-42
,共6页
梁爱敏%刘柱%张怀江%刘秀敏%陈明%陆伟%李国勋%林敏
樑愛敏%劉柱%張懷江%劉秀敏%陳明%陸偉%李國勛%林敏
량애민%류주%장부강%류수민%진명%륙위%리국훈%림민
易错PCR%随机突变%草甘膦抗性%EPSPs基因%二级结构预测
易錯PCR%隨機突變%草甘膦抗性%EPSPs基因%二級結構預測
역착PCR%수궤돌변%초감련항성%EPSPs기인%이급결구예측
运用易错PCR介导的随机突变技术使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶 (5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate,EPSPs) 基因发生随机突变,转入EPSPs基因缺陷型的大肠杆菌ER2799中,通过互补试验获得对草甘膦抗性明显降低的突变株AZ100.测序结果发现AZ100的EPSPs基因与未突变基因相比,碱基序列发生了两个位点变化,第792位的碱基由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T),第1203位的碱基由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G).氨基酸序列也发生了相应的变化,第264位由甘氨酸(Gly)突变为缬氨酸(Val),第401位由丙氨酸(Ala)突变为甘氨酸(Gly).二级结构预测显示此两个突变的氨基酸的位点恰好位于EPSPs与底物结合的关键部位.这两个氨基酸位点的突变,导致EPSPs在有草甘膦存在的情况下活性降低,从而导致菌株的草甘膦抗性降低.将这两个突变的碱基位点与美国的专利保护位点比较,发现这两个突变位点均不在专利保护范围之内.
運用易錯PCR介導的隨機突變技術使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮痠-3-燐痠莽草痠閤酶 (5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate,EPSPs) 基因髮生隨機突變,轉入EPSPs基因缺陷型的大腸桿菌ER2799中,通過互補試驗穫得對草甘膦抗性明顯降低的突變株AZ100.測序結果髮現AZ100的EPSPs基因與未突變基因相比,堿基序列髮生瞭兩箇位點變化,第792位的堿基由鳥嘌呤(G)突變為胸腺嘧啶(T),第1203位的堿基由胞嘧啶(C)突變為鳥嘌呤(G).氨基痠序列也髮生瞭相應的變化,第264位由甘氨痠(Gly)突變為纈氨痠(Val),第401位由丙氨痠(Ala)突變為甘氨痠(Gly).二級結構預測顯示此兩箇突變的氨基痠的位點恰好位于EPSPs與底物結閤的關鍵部位.這兩箇氨基痠位點的突變,導緻EPSPs在有草甘膦存在的情況下活性降低,從而導緻菌株的草甘膦抗性降低.將這兩箇突變的堿基位點與美國的專利保護位點比較,髮現這兩箇突變位點均不在專利保護範圍之內.
운용역착PCR개도적수궤돌변기술사고항초감련적균주적5-희순식병동산-3-린산망초산합매 (5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate,EPSPs) 기인발생수궤돌변,전입EPSPs기인결함형적대장간균ER2799중,통과호보시험획득대초감련항성명현강저적돌변주AZ100.측서결과발현AZ100적EPSPs기인여미돌변기인상비,감기서렬발생료량개위점변화,제792위적감기유조표령(G)돌변위흉선밀정(T),제1203위적감기유포밀정(C)돌변위조표령(G).안기산서렬야발생료상응적변화,제264위유감안산(Gly)돌변위힐안산(Val),제401위유병안산(Ala)돌변위감안산(Gly).이급결구예측현시차량개돌변적안기산적위점흡호위우EPSPs여저물결합적관건부위.저량개안기산위점적돌변,도치EPSPs재유초감련존재적정황하활성강저,종이도치균주적초감련항성강저.장저량개돌변적감기위점여미국적전리보호위점비교,발현저량개돌변위점균불재전리보호범위지내.
