CAJ | 학술논문

研究用分阶段共培养法进行体外扩增的脐血造血干/祖细胞对NOD/SCID小鼠重建造血功能的作用,探讨新扩增技术体系对将来临床移植的可行性.分离脐血单个核细胞,分别用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF组合(非共培养组合)和rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合(共培养组合)进行脐血造血干/祖细胞的体外扩增,并对扩增细胞进行流式细胞术和细胞集落形成能力分析.在移植实验中,将经致死剂量射线照射后的NOD/SCID小鼠随机分为3组,每组10只.A组:每只移植8.5×106个用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合扩增的细胞;B组:每只移植8.5×106个用rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF组合扩增的细胞;C组:每只仅输注0.5 mL生理盐水.移植后定期眼眶底部采血,分析重建造血.12周后取存活小鼠骨髓,检测人特异Alu基因的存在率.实验结果表明,rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+人骨髓间充质干细胞组合的共培养法显著提高了造血干/祖细胞的扩增倍数,并且有利于造血干/祖细胞的自我更新和提高细胞集落形成能力.两种组合扩增的细胞移植小鼠12 d后,小鼠的白细胞类群开始回升,25 d后基本恢复到了基数水平.在45～55 d后小鼠细胞有明显的第2个恢复期,并且共培养组合扩增细胞移植的小鼠中第2次恢复明显快于非共培养组合.12周后在两种组合移植的小鼠中检测到人特异Alu序列片段的概率分别为87.5%(7/8)和88.9%(8/9).由此可推论,分阶段共培养扩增体系有效地提高了脐血造血干/祖细胞的扩增能力和重建造血能力.
연구용분계단공배양법진행체외확증적제혈조혈간/조세포대NOD/SCID소서중건조혈공능적작용,탐토신확증기술체계대장래림상이식적가행성.분리제혈단개핵세포,분별용rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF조합(비공배양조합)화rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+인골수간충질간세포조합(공배양조합)진행제혈조혈간/조세포적체외확증,병대확증세포진행류식세포술화세포집락형성능력분석.재이식실험중,장경치사제량사선조사후적NOD/SCID소서수궤분위3조,매조10지.A조:매지이식8.5×106개용rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+인골수간충질간세포조합확증적세포;B조:매지이식8.5×106개용rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF조합확증적세포;C조:매지부수주0.5 mL생리염수.이식후정기안광저부채혈,분석중건조혈.12주후취존활소서골수,검측인특이Alu기인적존재솔.실험결과표명,rhSCF+rhG-CSF+rhMDGF+인골수간충질간세포조합적공배양법현저제고료조혈간/조세포적확증배수,병차유리우조혈간/조세포적자아경신화제고세포집락형성능력.량충조합확증적세포이식소서12 d후,소서적백세포류군개시회승,25 d후기본회복도료기수수평.재45～55 d후소서세포유명현적제2개회복기,병차공배양조합확증세포이식적소서중제2차회복명현쾌우비공배양조합.12주후재량충조합이식적소서중검측도인특이Alu서렬편단적개솔분별위87.5%(7/8)화88.9%(8/9).유차가추론,분계단공배양확증체계유효지제고료제혈조혈간/조세포적확증능력화중건조혈능력.