中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
1期
22-25
,共4页
赵华梅%潘秀珍%王长军%郭恒彬%李先富%唐家琪
趙華梅%潘秀珍%王長軍%郭恆彬%李先富%唐傢琪
조화매%반수진%왕장군%곽항빈%리선부%당가기
猪链球菌2型%谷氨酸脱氢酶%GDH家族I%NADP(H)-特异性GDH
豬鏈毬菌2型%穀氨痠脫氫酶%GDH傢族I%NADP(H)-特異性GDH
저련구균2형%곡안산탈경매%GDH가족I%NADP(H)-특이성GDH
目的克隆表达猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH),并测定其酶活性.方法设计引物采用PCR法自海安病人分离株Habb基因组扩增GDH的编码基因gdh,进行序列分析;构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测;通过亲和层析纯化,获得融合蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,获得完整的GDH纯化蛋白后测定其酶活性. 结果 PCR法自猪链球菌菌株Habb基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族I的典型保守序列;体外构建筛选原核表达质粒pGEX4T-2-gdh,诱导重组体,表达的蛋白经PAGE初步测定其相对分子质量(Mr)约为71×103;用凝血酶酶切去除融合蛋白中的GST标签后得到的蛋白相对分子质量为45×103;GDH活性测定显示猪链球菌GDH利用α-酮戊二酸做底物,用NADPH做辅酶催化氨的同化和谷氨酸的合成.结论克隆并表达出猪链球菌GDH;猪链球菌GDH属于GDH蛋白家族I,是NADP(H)-特异性GDH.
目的剋隆錶達豬鏈毬菌穀氨痠脫氫酶(GDH),併測定其酶活性.方法設計引物採用PCR法自海安病人分離株Habb基因組擴增GDH的編碼基因gdh,進行序列分析;構建重組錶達質粒pGEX4T-2-gdh,轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導錶達,PAGE檢測;通過親和層析純化,穫得融閤蛋白GST-GDH,用凝血酶剪切去除GST,穫得完整的GDH純化蛋白後測定其酶活性. 結果 PCR法自豬鏈毬菌菌株Habb基因組擴增齣約1.3kb的目的片段;序列分析顯示豬鏈毬菌的GDH具有GDH蛋白傢族I的典型保守序列;體外構建篩選原覈錶達質粒pGEX4T-2-gdh,誘導重組體,錶達的蛋白經PAGE初步測定其相對分子質量(Mr)約為71×103;用凝血酶酶切去除融閤蛋白中的GST標籤後得到的蛋白相對分子質量為45×103;GDH活性測定顯示豬鏈毬菌GDH利用α-酮戊二痠做底物,用NADPH做輔酶催化氨的同化和穀氨痠的閤成.結論剋隆併錶達齣豬鏈毬菌GDH;豬鏈毬菌GDH屬于GDH蛋白傢族I,是NADP(H)-特異性GDH.
목적극륭표체저련구균곡안산탈경매(GDH),병측정기매활성.방법설계인물채용PCR법자해안병인분리주Habb기인조확증GDH적편마기인gdh,진행서렬분석;구건중조표체질립pGEX4T-2-gdh,전화E.coli BL21(DE3),IPTG유도표체,PAGE검측;통과친화층석순화,획득융합단백GST-GDH,용응혈매전절거제GST,획득완정적GDH순화단백후측정기매활성. 결과 PCR법자저련구균균주Habb기인조확증출약1.3kb적목적편단;서렬분석현시저련구균적GDH구유GDH단백가족I적전형보수서렬;체외구건사선원핵표체질립pGEX4T-2-gdh,유도중조체,표체적단백경PAGE초보측정기상대분자질량(Mr)약위71×103;용응혈매매절거제융합단백중적GST표첨후득도적단백상대분자질량위45×103;GDH활성측정현시저련구균GDH이용α-동무이산주저물,용NADPH주보매최화안적동화화곡안산적합성.결론극륭병표체출저련구균GDH;저련구균GDH속우GDH단백가족I,시NADP(H)-특이성GDH.
