贵阳医学院学报
貴暘醫學院學報
귀양의학원학보
JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE
2007年
1期
5-8
,共4页
武迪迪%张杰%具英花%宗志宏%李雪松%于秉治
武迪迪%張傑%具英花%宗誌宏%李雪鬆%于秉治
무적적%장걸%구영화%종지굉%리설송%우병치
基因,p21%卵母细胞%荧光抚体技术%小鼠%绿色荧光蛋白
基因,p21%卵母細胞%熒光撫體技術%小鼠%綠色熒光蛋白
기인,p21%란모세포%형광무체기술%소서%록색형광단백
目的:通过构建绿色荧光蛋白p21-EGFP融合基因表达载体,观察其在小鼠卵母细胞中的表达及定位,为研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21对小鼠卵母细胞细胞周期的影响提供实验基础.方法:以含有p21的全长序列的质粒为模板PCR扩增p21cDNA , 应用基因重组技术与EGFP 基因融合, 构建以绿色荧光蛋白EGFP为报告基因的重组表达质粒pEGFP-p21.利用显微注射方法注射到小鼠卵母细胞中进行表达,用荧光显微镜直接观察pEGFP-p21融合蛋白在细胞中的分布和定位, Western Blot 方法检测其蛋白的表达.经酶切证实插入片断的正确性.结果:荧光显微镜观察结果显示在空载体pEGFP-C3转染的小鼠卵母细胞中,绿色荧光呈弥散分布,而经注射重组质粒pEGFP-p21 的小鼠卵母细胞中, 绿色荧光主要集中在细胞核内.同时用Western Blot 证实了pEGFP-p21 融合基因的表达.结论:成功的构建了pEGFP-p21 融合表达质粒.同时证明小鼠卵母细胞能高效表达pEGFP-p21 融合基因, 且主要定位于细胞核内.
目的:通過構建綠色熒光蛋白p21-EGFP融閤基因錶達載體,觀察其在小鼠卵母細胞中的錶達及定位,為研究細胞週期蛋白激酶抑製因子p21對小鼠卵母細胞細胞週期的影響提供實驗基礎.方法:以含有p21的全長序列的質粒為模闆PCR擴增p21cDNA , 應用基因重組技術與EGFP 基因融閤, 構建以綠色熒光蛋白EGFP為報告基因的重組錶達質粒pEGFP-p21.利用顯微註射方法註射到小鼠卵母細胞中進行錶達,用熒光顯微鏡直接觀察pEGFP-p21融閤蛋白在細胞中的分佈和定位, Western Blot 方法檢測其蛋白的錶達.經酶切證實插入片斷的正確性.結果:熒光顯微鏡觀察結果顯示在空載體pEGFP-C3轉染的小鼠卵母細胞中,綠色熒光呈瀰散分佈,而經註射重組質粒pEGFP-p21 的小鼠卵母細胞中, 綠色熒光主要集中在細胞覈內.同時用Western Blot 證實瞭pEGFP-p21 融閤基因的錶達.結論:成功的構建瞭pEGFP-p21 融閤錶達質粒.同時證明小鼠卵母細胞能高效錶達pEGFP-p21 融閤基因, 且主要定位于細胞覈內.
목적:통과구건록색형광단백p21-EGFP융합기인표체재체,관찰기재소서란모세포중적표체급정위,위연구세포주기단백격매억제인자p21대소서란모세포세포주기적영향제공실험기출.방법:이함유p21적전장서렬적질립위모판PCR확증p21cDNA , 응용기인중조기술여EGFP 기인융합, 구건이록색형광단백EGFP위보고기인적중조표체질립pEGFP-p21.이용현미주사방법주사도소서란모세포중진행표체,용형광현미경직접관찰pEGFP-p21융합단백재세포중적분포화정위, Western Blot 방법검측기단백적표체.경매절증실삽입편단적정학성.결과:형광현미경관찰결과현시재공재체pEGFP-C3전염적소서란모세포중,록색형광정미산분포,이경주사중조질립pEGFP-p21 적소서란모세포중, 록색형광주요집중재세포핵내.동시용Western Blot 증실료pEGFP-p21 융합기인적표체.결론:성공적구건료pEGFP-p21 융합표체질립.동시증명소서란모세포능고효표체pEGFP-p21 융합기인, 차주요정위우세포핵내.
