利用体细胞核移植技术生产表达增强绿色荧光蛋白(EGFP)的转人溶菌酶基因(HLY)的猪克隆胚胎
이용체세포핵이식기술생산표체증강록색형광단백(EGFP)적전인용균매기인(HLY)적저극륭배태
  • 万方数据
    自然科学进展 자연과학진전
    zirankexuejinzhan
    2008年 10期 1157-1162 ,共6页

    李秋艳%卫恒习%郭英%李燕%赵蕊%于政权%汤波%张磊%戴蕴平%李宁

    리추염%위항습%곽영%리연%조예%우정권%탕파%장뢰%대온평%리저

    EGFP%猪%核移植%胎儿成纤维细胞%人溶菌酶(HLY) EGFP%豬%覈移植%胎兒成纖維細胞%人溶菌酶(HLY)
    EGFP%저%핵이식%태인성섬유세포%인용균매(HLY)
    由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC1-HLY-GFP-NEO).分别对包含两个品种(五指山猪、长白猪)的5个细胞系(sw7,sw8,slw3,slw6和slw9)进行了转染.经过14 d,1000μg/mL浓度G418药物的筛选处理,sw7,sw8,slw3和slw6等4个细胞系的95%以上细胞都表达绿色荧光蛋白,而细胞系slw9的转染效率只有49.3%.用转染效率高的3个细胞系作为核供体构建猪克隆胚胎,通过电刺激方法进行融合和激活,然后在PZM3中体外培养.48 h后,重构胚的平均卵裂率为76.7%;经过7 d培养后观察,有18.5%的胚胎发育到囊胚阶段,其中93.3%的囊胚在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,但囊胚之间的荧光强度存在差异.研究结果表明,通过脂质体介导的方法可以获得高转染效率的转基因猪胎儿成纤维细胞系,但细胞系之间的转染效率不同;用转基因猪胎儿成纤维细胞构建的重构胚,能够成功发育到囊胚阶段,而且大多数为表达绿色荧光蛋白的阳性胚胎.
    유우생리특성화기관대소적원인,저재인류질병모형화기관이식방면구유흔대적응용잠력.정인여차,저기인결구적수식대농업생산화인류의학량방면도의의중대.연구용지질체개도적방법전염료저태인성섬유세포,소용결구위쌍표적인용균매질립(pBC1-HLY-GFP-NEO).분별대포함량개품충(오지산저、장백저)적5개세포계(sw7,sw8,slw3,slw6화slw9)진행료전염.경과14 d,1000μg/mL농도G418약물적사선처리,sw7,sw8,slw3화slw6등4개세포계적95%이상세포도표체록색형광단백,이세포계slw9적전염효솔지유49.3%.용전염효솔고적3개세포계작위핵공체구건저극륭배태,통과전자격방법진행융합화격활,연후재PZM3중체외배양.48 h후,중구배적평균란렬솔위76.7%;경과7 d배양후관찰,유18.5%적배태발육도낭배계단,기중93.3%적낭배재형광현미경하능구발출록색형광,단낭배지간적형광강도존재차이.연구결과표명,통과지질체개도적방법가이획득고전염효솔적전기인저태인성섬유세포계,단세포계지간적전염효솔불동;용전기인저태인성섬유세포구건적중구배,능구성공발육도낭배계단,이차대다수위표체록색형광단백적양성배태.
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