CAJ | 학술논문

本文以华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita中肠为材料,依据Stratagene公司文库构建试剂盒方法,构建其中肠cDNA表达文库,该文库滴度为1.9×106pfu/mL,重组率为99.97%.依据现代免疫学原理,利用棉铃虫Helicoverpa armigera围食膜蛋白多克隆抗体筛选文库,得到两个编码华北大黑鳃金龟围食膜蛋白的cDNA克隆Ho-Peritrophinl与Ho-Peritrophin2,其cDNA长分别为2 385 bp和1 633 bp,在polyA末端上游各有3个多聚腺苷酸信号序列AATAAA,最长开放阅读框(ORF)分别编码729个和477个氨基酸,与粉纹夜蛾Trichoplusia ni CBP2(chitin binding protein 2)的相似性最高,分别为21.9%和19.1%.结构域分析表明,Ho-Peritrophinl与Ho-Peritrophin2分别具有9个和6个几丁质结合功能域,只含有较少的O-糖基化位点,不含有类粘蛋白结构域.胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对两种蛋白的作用位点主要位于几丁质结合功能域(chitin binding domain,CBD)内部,而因受几丁质结合功能域保护,这两种蛋白能够抵抗这些蛋白酶的降解.与正常CBD比较,这两种蛋白C端的CBD只含有4个Cys,只在第1与第3、第4与第5个Cys之间形成两对二硫键,缺少南第2与第6个Cys形成的二硫键.推测其N端还应包括信号肽序列和几丁质结合功能域的未知序列.
본문이화북대흑새금구Holotrichia oblita중장위재료,의거Stratagene공사문고구건시제합방법,구건기중장cDNA표체문고,해문고적도위1.9×106pfu/mL,중조솔위99.97%.의거현대면역학원리,이용면령충Helicoverpa armigera위식막단백다극륭항체사선문고,득도량개편마화북대흑새금구위식막단백적cDNA극륭Ho-Peritrophinl여Ho-Peritrophin2,기cDNA장분별위2 385 bp화1 633 bp,재polyA말단상유각유3개다취선감산신호서렬AATAAA,최장개방열독광(ORF)분별편마729개화477개안기산,여분문야아Trichoplusia ni CBP2(chitin binding protein 2)적상사성최고,분별위21.9%화19.1%.결구역분석표명,Ho-Peritrophinl여Ho-Peritrophin2분별구유9개화6개궤정질결합공능역,지함유교소적O-당기화위점,불함유류점단백결구역.이단백매화이응유단백매대량충단백적작용위점주요위우궤정질결합공능역(chitin binding domain,CBD)내부,이인수궤정질결합공능역보호,저량충단백능구저항저사단백매적강해.여정상CBD비교,저량충단백C단적CBD지함유4개Cys,지재제1여제3、제4여제5개Cys지간형성량대이류건,결소남제2여제6개Cys형성적이류건.추측기N단환응포괄신호태서렬화궤정질결합공능역적미지서렬.