浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2009年
1期
35-38
,共4页
陆永干%戴贤君%姚建红%黄利权
陸永榦%戴賢君%姚建紅%黃利權
륙영간%대현군%요건홍%황리권
猪瘟病毒%荧光定量PCR%重组质粒
豬瘟病毒%熒光定量PCR%重組質粒
저온병독%형광정량PCR%중조질립
设计扩增猪瘟病毒(swine fever virus,SFV)核酸5'端非翻译区的引物,采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD-18 simple T质粒,重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒经PCR和序列测定证实为阳性重组质粒,命名为pSF.将构建的pSF作为标准阳性模板进行荧光定量PCR(FQ-PCR)检测表明,此模板在-20℃保存6个月对结果无显著影响;对于1×109,1×107,1×105拷贝/2μl的pSF用FQ-PCR方法测定的Ct值最大变异系数分别为1.55%;使用该模板建立的定量范围为1×102～1×1011拷贝/2μl;构建的阳性重组质粒pSF具有良好的稳定性和特异性.该方法可以用于临床诊断.
設計擴增豬瘟病毒(swine fever virus,SFV)覈痠5'耑非翻譯區的引物,採用RT-PCR方法剋隆目的片段併插入PMD-18 simple T質粒,重組質粒轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞,提取質粒經PCR和序列測定證實為暘性重組質粒,命名為pSF.將構建的pSF作為標準暘性模闆進行熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測錶明,此模闆在-20℃保存6箇月對結果無顯著影響;對于1×109,1×107,1×105拷貝/2μl的pSF用FQ-PCR方法測定的Ct值最大變異繫數分彆為1.55%;使用該模闆建立的定量範圍為1×102～1×1011拷貝/2μl;構建的暘性重組質粒pSF具有良好的穩定性和特異性.該方法可以用于臨床診斷.
설계확증저온병독(swine fever virus,SFV)핵산5'단비번역구적인물,채용RT-PCR방법극륭목적편단병삽입PMD-18 simple T질립,중조질립전화대장간균DH5α감수태세포,제취질립경PCR화서렬측정증실위양성중조질립,명명위pSF.장구건적pSF작위표준양성모판진행형광정량PCR(FQ-PCR)검측표명,차모판재-20℃보존6개월대결과무현저영향;대우1×109,1×107,1×105고패/2μl적pSF용FQ-PCR방법측정적Ct치최대변이계수분별위1.55%;사용해모판건립적정량범위위1×102～1×1011고패/2μl;구건적양성중조질립pSF구유량호적은정성화특이성.해방법가이용우림상진단.
