中国药物与临床
中國藥物與臨床
중국약물여림상
CHINESE REMEDIES & CLINICS
2009年
3期
168-171
,共4页
贺杰峰%查运红%赵浩亮%李辉宇%马小军%冯炜%张悦
賀傑峰%查運紅%趙浩亮%李輝宇%馬小軍%馮煒%張悅
하걸봉%사운홍%조호량%리휘우%마소군%풍위%장열
树突细胞%CD40配体%淋巴细胞培养试验%混合
樹突細胞%CD40配體%淋巴細胞培養試驗%混閤
수돌세포%CD40배체%림파세포배양시험%혼합
目的 探讨可溶性CD40-增强绿色荧光蛋白C(sCD40-EGFP)修饰树突状细胞(DC)对实验动物免疫功能的影响,为利用DC诱导供体特异性移植免疫耐受提供实验依据.方法 应用基因工程技术构建CD40胞外区与EGFP重组载体质粒pEGFP-N1/sCD40,采用脂质体转染法,将其导入DC2.4细胞株.采用荧光分光光度计和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定转染质粒pEGFP-N1/sCD40的DC培养上清;将经未修饰DC细胞及sCD40-EGFP及空载体修饰DC经腹腔注射致敏Balb/c小鼠,取单个核细胞作为反应细胞,分别以不同组DC为刺激细胞,行混合淋巴细胞培养,采用MTS比色法检测细胞增殖,乳酸脱氢酶法测定细胞毒活性.结果 sCD40分子与EGFP融合基因载体构建成功,在树突状细胞中获得表达,并分泌至上清;sCD0-EGFP融合蛋白对不同组DC致敏或未致敏小鼠的同种细胞刺激的增殖反应均有明显的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC诱导不同DC致敏组小鼠淋巴细胞增殖反应均明显降低,sCD40-EGFP融合蛋白对各实验组淋巴细胞胞毒活性有显著的抑制作用,sCD40-EGFP基因修饰DC致敏组小鼠淋巴细胞胞毒活性较其余实验组明显降低.结论 稳定表达sCD40-EGFP融合蛋自的DC致敏可显著降低同种小鼠淋巴细胞的增殖反应,并能诱导淋巴细胞对靶细胞的胞毒活性降低.
目的 探討可溶性CD40-增彊綠色熒光蛋白C(sCD40-EGFP)脩飾樹突狀細胞(DC)對實驗動物免疫功能的影響,為利用DC誘導供體特異性移植免疫耐受提供實驗依據.方法 應用基因工程技術構建CD40胞外區與EGFP重組載體質粒pEGFP-N1/sCD40,採用脂質體轉染法,將其導入DC2.4細胞株.採用熒光分光光度計和十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定轉染質粒pEGFP-N1/sCD40的DC培養上清;將經未脩飾DC細胞及sCD40-EGFP及空載體脩飾DC經腹腔註射緻敏Balb/c小鼠,取單箇覈細胞作為反應細胞,分彆以不同組DC為刺激細胞,行混閤淋巴細胞培養,採用MTS比色法檢測細胞增殖,乳痠脫氫酶法測定細胞毒活性.結果 sCD40分子與EGFP融閤基因載體構建成功,在樹突狀細胞中穫得錶達,併分泌至上清;sCD0-EGFP融閤蛋白對不同組DC緻敏或未緻敏小鼠的同種細胞刺激的增殖反應均有明顯的抑製作用,sCD40-EGFP基因脩飾DC誘導不同DC緻敏組小鼠淋巴細胞增殖反應均明顯降低,sCD40-EGFP融閤蛋白對各實驗組淋巴細胞胞毒活性有顯著的抑製作用,sCD40-EGFP基因脩飾DC緻敏組小鼠淋巴細胞胞毒活性較其餘實驗組明顯降低.結論 穩定錶達sCD40-EGFP融閤蛋自的DC緻敏可顯著降低同種小鼠淋巴細胞的增殖反應,併能誘導淋巴細胞對靶細胞的胞毒活性降低.
목적 탐토가용성CD40-증강록색형광단백C(sCD40-EGFP)수식수돌상세포(DC)대실험동물면역공능적영향,위이용DC유도공체특이성이식면역내수제공실험의거.방법 응용기인공정기술구건CD40포외구여EGFP중조재체질립pEGFP-N1/sCD40,채용지질체전염법,장기도입DC2.4세포주.채용형광분광광도계화십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)감정전염질립pEGFP-N1/sCD40적DC배양상청;장경미수식DC세포급sCD40-EGFP급공재체수식DC경복강주사치민Balb/c소서,취단개핵세포작위반응세포,분별이불동조DC위자격세포,행혼합림파세포배양,채용MTS비색법검측세포증식,유산탈경매법측정세포독활성.결과 sCD40분자여EGFP융합기인재체구건성공,재수돌상세포중획득표체,병분비지상청;sCD0-EGFP융합단백대불동조DC치민혹미치민소서적동충세포자격적증식반응균유명현적억제작용,sCD40-EGFP기인수식DC유도불동DC치민조소서림파세포증식반응균명현강저,sCD40-EGFP융합단백대각실험조림파세포포독활성유현저적억제작용,sCD40-EGFP기인수식DC치민조소서림파세포포독활성교기여실험조명현강저.결론 은정표체sCD40-EGFP융합단자적DC치민가현저강저동충소서림파세포적증식반응,병능유도림파세포대파세포적포독활성강저.
