现代泌尿外科杂志
現代泌尿外科雜誌
현대비뇨외과잡지
JOURNAL OF MODERN UROLOGY
2009年
4期
273-277
,共5页
杜岳峰%龙清志%樊桂玲%梁亮
杜嶽峰%龍清誌%樊桂玲%樑亮
두악봉%룡청지%번계령%량량
短发夹RNA%逆转录病毒%人端粒酶逆转录酶%膀胱肿瘤
短髮夾RNA%逆轉錄病毒%人耑粒酶逆轉錄酶%膀胱腫瘤
단발협RNA%역전록병독%인단립매역전록매%방광종류
目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的趋化因子受体4(CXCR4)的短发夹RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并研究其对hTERT阳性膀胱癌细胞中CXCR4表达的抑制效应及对细胞侵袭、增殖的影响.方法 用PCR扩增特异CXCR4-shRNA的DNA片段,以hTERT启动子代替U6启动子,将重组基因片段导入到逆转录病毒载体,收获病毒后分别感染膀胱癌细胞BIU87及人胚肺成纤维细胞MRC5和人乳腺癌细胞MCF7,RT-PCR、Western blot检测CXCR4 mRNA及蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖变化.TransweU小室实验检测细胞体外侵袭能力的变化.结果 hTERTpro-CXCR4.shRNA能显著抑制MCF7、BIU87细胞CXCR4 mRNA及蛋白的表达,48h mRNA抑制率分别为(87.09±7.60)%、(91.02±11.32)%,48h蛋白抑制率分别为(89.014±4.87)%、(90.424±9.64)%,其对MRC5细胞不抑制.感染重组病毒的膀胱癌细胞体外侵袭、增殖能力均显著下降.结论 重组病毒中hTERT启动子调控的下游RNA干扰序列可靶向表达于hTERT阳性膀胱癌细胞、乳腺癌细胞,不表达于hTERT阴性MRC5细胞.
目的 構建人耑粒酶逆轉錄酶(hTERT)啟動子調控的趨化因子受體4(CXCR4)的短髮夾RNA(shRNA)逆轉錄病毒錶達載體,併研究其對hTERT暘性膀胱癌細胞中CXCR4錶達的抑製效應及對細胞侵襲、增殖的影響.方法 用PCR擴增特異CXCR4-shRNA的DNA片段,以hTERT啟動子代替U6啟動子,將重組基因片段導入到逆轉錄病毒載體,收穫病毒後分彆感染膀胱癌細胞BIU87及人胚肺成纖維細胞MRC5和人乳腺癌細胞MCF7,RT-PCR、Western blot檢測CXCR4 mRNA及蛋白的錶達.MTT法檢測細胞增殖變化.TransweU小室實驗檢測細胞體外侵襲能力的變化.結果 hTERTpro-CXCR4.shRNA能顯著抑製MCF7、BIU87細胞CXCR4 mRNA及蛋白的錶達,48h mRNA抑製率分彆為(87.09±7.60)%、(91.02±11.32)%,48h蛋白抑製率分彆為(89.014±4.87)%、(90.424±9.64)%,其對MRC5細胞不抑製.感染重組病毒的膀胱癌細胞體外侵襲、增殖能力均顯著下降.結論 重組病毒中hTERT啟動子調控的下遊RNA榦擾序列可靶嚮錶達于hTERT暘性膀胱癌細胞、乳腺癌細胞,不錶達于hTERT陰性MRC5細胞.
목적 구건인단립매역전록매(hTERT)계동자조공적추화인자수체4(CXCR4)적단발협RNA(shRNA)역전록병독표체재체,병연구기대hTERT양성방광암세포중CXCR4표체적억제효응급대세포침습、증식적영향.방법 용PCR확증특이CXCR4-shRNA적DNA편단,이hTERT계동자대체U6계동자,장중조기인편단도입도역전록병독재체,수획병독후분별감염방광암세포BIU87급인배폐성섬유세포MRC5화인유선암세포MCF7,RT-PCR、Western blot검측CXCR4 mRNA급단백적표체.MTT법검측세포증식변화.TransweU소실실험검측세포체외침습능력적변화.결과 hTERTpro-CXCR4.shRNA능현저억제MCF7、BIU87세포CXCR4 mRNA급단백적표체,48h mRNA억제솔분별위(87.09±7.60)%、(91.02±11.32)%,48h단백억제솔분별위(89.014±4.87)%、(90.424±9.64)%,기대MRC5세포불억제.감염중조병독적방광암세포체외침습、증식능력균현저하강.결론 중조병독중hTERT계동자조공적하유RNA간우서렬가파향표체우hTERT양성방광암세포、유선암세포,불표체우hTERT음성MRC5세포.
