CAJ | 학술논문

背景:骨髓基质干细胞可定向诱导分化为神经元样细胞,但目前培养的方法尚不统一.目的:采用预诱导与全反式维甲酸和脑源性神经营养因子为培养体系,拟在体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向神经细胞分化.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-06在新疆医科大学第一附属医院医学研究中心干细胞室完成.材料:清洁级雄性SD大鼠2只,由新疆医科大学动物试验中心提供.方法:采用贴壁法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,经反复传代细胞逐渐纯化.取生长状态良好的第3代骨髓基质干细胞,按8×107L-1密度接种后,改换含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 μg/L表皮生长因子的神经干细胞培养体系进行预诱导,48 h后去除预诱导液,加入含10 μg/L脑源性神经生长因子、1 μmol/L全反式维甲酸的神经干细胞培养体系定向诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞.以未诱导的骨髓基质干细胞作为对照.主要观察指标:流式细胞仪检测第3代骨髓基质干细胞表面标志的表达,诱导后免疫荧光染色和流式细胞仪检测巢蛋白阳性的表达,免疫荧光染色鉴定神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:第3代骨髓基质干细胞CD29,CD44表达率分别为97.1%,99%,CD45表达率为0.5%,CD34呈阴性表达.预诱导48 h后巢蛋白阳性率为24%,而对照组仅为4.6%.诱导48 h后,巢蛋白染色呈阳性,并可见大量神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞出现;对照组均呈阴性表达.结论:神经干细胞培养体系联合全反式维甲酸与脑源性神经生长因子,可在体外高效、稳定地诱导骨髓基质干细胞转化为神经元样细胞,并进一步向神经元和神经胶质细胞方向分化.
배경:골수기질간세포가정향유도분화위신경원양세포,단목전배양적방법상불통일.목적:채용예유도여전반식유갑산화뇌원성신경영양인자위배양체계,의재체외유도대서골수기질간세포향신경세포분화.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-12/2008-06재신강의과대학제일부속의원의학연구중심간세포실완성.재료:청길급웅성SD대서2지,유신강의과대학동물시험중심제공.방법:채용첩벽법체외분리배양대서골수기질간세포,경반복전대세포축점순화.취생장상태량호적제3대골수기질간세포,안8×107L-1밀도접충후,개환함10 μg/L감성성섬유세포생장인자、20 μg/L표피생장인자적신경간세포배양체계진행예유도,48 h후거제예유도액,가입함10 μg/L뇌원성신경생장인자、1 μmol/L전반식유갑산적신경간세포배양체계정향유도골수기질간세포분화위신경세포.이미유도적골수기질간세포작위대조.주요관찰지표:류식세포의검측제3대골수기질간세포표면표지적표체,유도후면역형광염색화류식세포의검측소단백양성적표체,면역형광염색감정신경원특이성희순화매화효질섬유산성단백적표체.결과:제3대골수기질간세포CD29,CD44표체솔분별위97.1%,99%,CD45표체솔위0.5%,CD34정음성표체.예유도48 h후소단백양성솔위24%,이대조조부위4.6%.유도48 h후,소단백염색정양성,병가견대량신경원특이성희순화매화효질섬유산성단백양성세포출현;대조조균정음성표체.결론:신경간세포배양체계연합전반식유갑산여뇌원성신경생장인자,가재체외고효、은정지유도골수기질간세포전화위신경원양세포,병진일보향신경원화신경효질세포방향분화.