生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
6期
842-845
,共4页
转录因子MYB77%津田芜菁%融合蛋白%原核表达%纯化
轉錄因子MYB77%津田蕪菁%融閤蛋白%原覈錶達%純化
전록인자MYB77%진전무정%융합단백%원핵표체%순화
目的:建立津田芜菁转录因子MYB77的原核表达系统,并在大肠杆菌中获得表达.方法:RT-PCR获得MYB77的编码序列,将其克隆至pGEM-T载体中,在上下游引物中分别引入HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点,PCR获得带酶切位点的目的片段并将其连接到重组表达载体pGEX-KG中,转化大肠杆菌DE3工程菌株,IPTG诱导重组质粒pGEX-KG-MYB77在大肠杆菌DE3中表达带有GST标签的融合蛋白,超声裂解大肠杆菌,用MagneGST Protein Purification System纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE和Western印迹验证GST-MYB77融合蛋白的表达.结果:重组菌株可以表达GST-MYB77融合蛋白,用Western印迹鉴定纯化的融合蛋白,在相对分子质量为55.56×103处检测到目的条带.结论:利用大肠杆菌表达系统获得了较高纯度的GST-MYB77融合蛋白,为进一步研究津田芜菁MYB77蛋白的功能奠定了基础.
目的:建立津田蕪菁轉錄因子MYB77的原覈錶達繫統,併在大腸桿菌中穫得錶達.方法:RT-PCR穫得MYB77的編碼序列,將其剋隆至pGEM-T載體中,在上下遊引物中分彆引入HindⅢ和EcoRⅠ酶切位點,PCR穫得帶酶切位點的目的片段併將其連接到重組錶達載體pGEX-KG中,轉化大腸桿菌DE3工程菌株,IPTG誘導重組質粒pGEX-KG-MYB77在大腸桿菌DE3中錶達帶有GST標籤的融閤蛋白,超聲裂解大腸桿菌,用MagneGST Protein Purification System純化目的蛋白,通過SDS-PAGE和Western印跡驗證GST-MYB77融閤蛋白的錶達.結果:重組菌株可以錶達GST-MYB77融閤蛋白,用Western印跡鑒定純化的融閤蛋白,在相對分子質量為55.56×103處檢測到目的條帶.結論:利用大腸桿菌錶達繫統穫得瞭較高純度的GST-MYB77融閤蛋白,為進一步研究津田蕪菁MYB77蛋白的功能奠定瞭基礎.
목적:건립진전무정전록인자MYB77적원핵표체계통,병재대장간균중획득표체.방법:RT-PCR획득MYB77적편마서렬,장기극륭지pGEM-T재체중,재상하유인물중분별인입HindⅢ화EcoRⅠ매절위점,PCR획득대매절위점적목적편단병장기련접도중조표체재체pGEX-KG중,전화대장간균DE3공정균주,IPTG유도중조질립pGEX-KG-MYB77재대장간균DE3중표체대유GST표첨적융합단백,초성렬해대장간균,용MagneGST Protein Purification System순화목적단백,통과SDS-PAGE화Western인적험증GST-MYB77융합단백적표체.결과:중조균주가이표체GST-MYB77융합단백,용Western인적감정순화적융합단백,재상대분자질량위55.56×103처검측도목적조대.결론:이용대장간균표체계통획득료교고순도적GST-MYB77융합단백,위진일보연구진전무정MYB77단백적공능전정료기출.
