CAJ | 학술논문

目的克隆表达B.longum NCC2705果糖ABC转运系统中BL0033、BL0034及其截短突变体,验证两蛋白的体外相互作用,并确定介导彼此相互作用的功能区域.方法将bl0033与bl0034基因克隆至载体pGEX-4T-1和pET32a并在E.coli中表达,采用谷胱甘肽-Sepharose 4B和镍柱分别对GST和His融合的蛋白进行纯化,GST pull-down验证BL0033与BL0034蛋白之间的相互作用.为了进一步确定BL0033和BL0034的作用位点,根据BL0033和BL0034基序特征构建截短突变体,GST pull-down实验检测截短体与完整蛋白结合的能力,确定介导相互作用的区域.结果在大肠杆菌中实现了融合蛋白的可溶性表达,经亲和层析获得了融合蛋白.GST pull-down实验证实BL0033与BL0034存在相互作用,其中BL0033的截短体1～23 aa能与BL0034结合,而截短体36～314 aa丧失了与BL0034的结合能力;BL0034的3个截短体中BL0034/8～244 aa、BL0034/33～220 aa能与BL0033相互作用,而BL0034/289～481 aa与BL0033没有作用.结论证实了BL0033与BL0034之间的相互作用,并确定BL0033的1～23 aa基序与BL0034的33～220 aa基序是这种相互作用的结构域,为进一步研究B.longum NCC2705果糖ABC转运系统的分子机制奠定了理论基础.
목적 극륭표체B.longum NCC2705과당ABC전운계통중BL0033、BL0034급기절단돌변체,험증량단백적체외상호작용,병학정개도피차상호작용적공능구역.방법 장bl0033여bl0034기인극륭지재체pGEX-4T-1화pET32a병재E.coli중표체,채용곡광감태-Sepharose 4B화얼주분별대GST화His융합적단백진행순화,GST pull-down험증BL0033여BL0034단백지간적상호작용.위료진일보학정BL0033화BL0034적작용위점,근거BL0033화BL0034기서특정구건절단돌변체,GST pull-down실험검측절단체여완정단백결합적능력,학정개도상호작용적구역.결과 재대장간균중실현료융합단백적가용성표체,경친화층석획득료융합단백.GST pull-down실험증실BL0033여BL0034존재상호작용,기중BL0033적절단체1～23 aa능여BL0034결합,이절단체36～314 aa상실료여BL0034적결합능력;BL0034적3개절단체중BL0034/8～244 aa、BL0034/33～220 aa능여BL0033상호작용,이BL0034/289～481 aa여BL0033몰유작용.결론 증실료BL0033여BL0034지간적상호작용,병학정BL0033적1～23 aa기서여BL0034적33～220 aa기서시저충상호작용적결구역,위진일보연구B.longum NCC2705과당ABC전운계통적분자궤제전정료이론기출.