植物保护
植物保護
식물보호
PLANT PROTECTION
2010年
5期
33-37
,共5页
黄亚丽%蒋细良%田云龙%朱昌雄
黃亞麗%蔣細良%田雲龍%硃昌雄
황아려%장세량%전운룡%주창웅
木霉%T-DNA插入突变体%TAIL-PCR%序列分析
木黴%T-DNA插入突變體%TAIL-PCR%序列分析
목매%T-DNA삽입돌변체%TAIL-PCR%서렬분석
利用分子生物学技术扩增T-DNA插入突变体中T-DNA侧翼未知序列是克隆突变相关基因、研究T-DNA整合方式的基础,TAIL-PCR是扩增已知序列侧翼未知序列的有效方法,本研究根据哈茨木霉的基因组特点,引用和设计了12条随机AD引物,用这些引物分别与3条右边界嵌套特异引物进行组合对哈茨木霉突变子的T-DNA侧翼未知序列进行扩增,发现不同的随机引物的扩增效率差异很大,以AD5的扩增效率最高,能扩增出80%的T-DNA插入位点的侧翼序列.随机挑取哈茨木霉T-DNA插入突变子52个,选用引物AD5对T-DNA插入位点的侧翼序列进行TAIL-PCR扩增并分析扩增序列发现,在获得的42条侧翼序列中7条只含有质粒序列、33条对应着单一的侧翼序列T-DNA、另外2条序列相同.34条T-DNA侧翼边界序列中13条保存着完整的右边界序列,21条T-DNA边界序列存在一定程度的缺失现象,说明农杆菌转化哈茨木霉的过程中T-DNA右边界存在一定程度的剪切.该研究的进行对明确农杆菌介导的木霉遗传转化过程中T-DNA的整合方式具有一定意义,为研究农杆菌转化木霉的机理奠定了实验基础.研究也精细确定了33个不同突变株的T-DNA插入位置,为后续的基因功能研究奠定基础.
利用分子生物學技術擴增T-DNA插入突變體中T-DNA側翼未知序列是剋隆突變相關基因、研究T-DNA整閤方式的基礎,TAIL-PCR是擴增已知序列側翼未知序列的有效方法,本研究根據哈茨木黴的基因組特點,引用和設計瞭12條隨機AD引物,用這些引物分彆與3條右邊界嵌套特異引物進行組閤對哈茨木黴突變子的T-DNA側翼未知序列進行擴增,髮現不同的隨機引物的擴增效率差異很大,以AD5的擴增效率最高,能擴增齣80%的T-DNA插入位點的側翼序列.隨機挑取哈茨木黴T-DNA插入突變子52箇,選用引物AD5對T-DNA插入位點的側翼序列進行TAIL-PCR擴增併分析擴增序列髮現,在穫得的42條側翼序列中7條隻含有質粒序列、33條對應著單一的側翼序列T-DNA、另外2條序列相同.34條T-DNA側翼邊界序列中13條保存著完整的右邊界序列,21條T-DNA邊界序列存在一定程度的缺失現象,說明農桿菌轉化哈茨木黴的過程中T-DNA右邊界存在一定程度的剪切.該研究的進行對明確農桿菌介導的木黴遺傳轉化過程中T-DNA的整閤方式具有一定意義,為研究農桿菌轉化木黴的機理奠定瞭實驗基礎.研究也精細確定瞭33箇不同突變株的T-DNA插入位置,為後續的基因功能研究奠定基礎.
이용분자생물학기술확증T-DNA삽입돌변체중T-DNA측익미지서렬시극륭돌변상관기인、연구T-DNA정합방식적기출,TAIL-PCR시확증이지서렬측익미지서렬적유효방법,본연구근거합자목매적기인조특점,인용화설계료12조수궤AD인물,용저사인물분별여3조우변계감투특이인물진행조합대합자목매돌변자적T-DNA측익미지서렬진행확증,발현불동적수궤인물적확증효솔차이흔대,이AD5적확증효솔최고,능확증출80%적T-DNA삽입위점적측익서렬.수궤도취합자목매T-DNA삽입돌변자52개,선용인물AD5대T-DNA삽입위점적측익서렬진행TAIL-PCR확증병분석확증서렬발현,재획득적42조측익서렬중7조지함유질립서렬、33조대응착단일적측익서렬T-DNA、령외2조서렬상동.34조T-DNA측익변계서렬중13조보존착완정적우변계서렬,21조T-DNA변계서렬존재일정정도적결실현상,설명농간균전화합자목매적과정중T-DNA우변계존재일정정도적전절.해연구적진행대명학농간균개도적목매유전전화과정중T-DNA적정합방식구유일정의의,위연구농간균전화목매적궤리전정료실험기출.연구야정세학정료33개불동돌변주적T-DNA삽입위치,위후속적기인공능연구전정기출.
