中国骨质疏松杂志
中國骨質疏鬆雜誌
중국골질소송잡지
CHINESE JOURNAL OF OSTEOPOROSIS
2012年
1期
24-28
,共5页
破骨细胞%钠氢转运蛋白2%酿酒酵母%生长曲线
破骨細胞%鈉氫轉運蛋白2%釀酒酵母%生長麯線
파골세포%납경전운단백2%양주효모%생장곡선
目的 在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2(HsNHA2),鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能,并对其在细胞中的表达进行初步定位分析.方法 采用高保真PCR试剂盒扩增出HsNHA2；构建酵母表达载体,通过电穿孔的方式转入到酿酒酵母菌株中；Western印迹检测其在酵母菌株的表达；通过NaCl选择压力观察菌株在高盐环境中的生长表型,并用根皮素抑制HsNHA2观察其抗盐功能；最后用细胞原位荧光染色确定HsNHA2在细胞中的表达位置.结果 Western印迹证实HsNHA2在酵母菌株中正常表达；生长曲线显示HsNHA2可使菌株在高盐环境中生长,根皮素抑制HsNHA2表达后菌株不能在0.2mol/L NaCl培养基中生长；免疫荧光染色初步证明HsNHA2表达在细胞膜上.结论 HsNHA2作为盐离子载体在酵母细胞中主要表达在细胞膜上行使转运Na+的功能,以维持细胞正常生长.
目的 在釀酒酵母中異源錶達人破骨細胞分化成熟潛在因子鈉氫轉運蛋白2(HsNHA2),鑒定其作為鹽離子載體轉運Na+的功能,併對其在細胞中的錶達進行初步定位分析.方法 採用高保真PCR試劑盒擴增齣HsNHA2；構建酵母錶達載體,通過電穿孔的方式轉入到釀酒酵母菌株中；Western印跡檢測其在酵母菌株的錶達；通過NaCl選擇壓力觀察菌株在高鹽環境中的生長錶型,併用根皮素抑製HsNHA2觀察其抗鹽功能；最後用細胞原位熒光染色確定HsNHA2在細胞中的錶達位置.結果 Western印跡證實HsNHA2在酵母菌株中正常錶達；生長麯線顯示HsNHA2可使菌株在高鹽環境中生長,根皮素抑製HsNHA2錶達後菌株不能在0.2mol/L NaCl培養基中生長；免疫熒光染色初步證明HsNHA2錶達在細胞膜上.結論 HsNHA2作為鹽離子載體在酵母細胞中主要錶達在細胞膜上行使轉運Na+的功能,以維持細胞正常生長.
목적 재양주효모중이원표체인파골세포분화성숙잠재인자납경전운단백2(HsNHA2),감정기작위염리자재체전운Na+적공능,병대기재세포중적표체진행초보정위분석.방법 채용고보진PCR시제합확증출HsNHA2；구건효모표체재체,통과전천공적방식전입도양주효모균주중；Western인적검측기재효모균주적표체；통과NaCl선택압력관찰균주재고염배경중적생장표형,병용근피소억제HsNHA2관찰기항염공능；최후용세포원위형광염색학정HsNHA2재세포중적표체위치.결과 Western인적증실HsNHA2재효모균주중정상표체；생장곡선현시HsNHA2가사균주재고염배경중생장,근피소억제HsNHA2표체후균주불능재0.2mol/L NaCl배양기중생장；면역형광염색초보증명HsNHA2표체재세포막상.결론 HsNHA2작위염리자재체재효모세포중주요표체재세포막상행사전운Na+적공능,이유지세포정상생장.
