科技通报
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과기통보
BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2012年
3期
68-74,83
,共8页
孙金权%许健%沈雯%吴晓莉%牟一平%张婷%沃兴德
孫金權%許健%瀋雯%吳曉莉%牟一平%張婷%沃興德
손금권%허건%침문%오효리%모일평%장정%옥흥덕
pEGFP-C1%hIL- 18%BxPC-3细胞%突变子
pEGFP-C1%hIL- 18%BxPC-3細胞%突變子
pEGFP-C1%hIL- 18%BxPC-3세포%돌변자
目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功；(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体；(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达.
目的:設計穫得5段hIL-18異構體,定嚮插入pEGFP-C1質粒形成融閤基因,轉染胰腺癌Bx-PC-3細胞併錶達,為進一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定實驗基礎.方法:設計引物從pGEM-T-hIL-18質粒中PCR擴增得到5段不同的hIL-18片段,分彆連接入pEGFP-C1載體構建不同的突變子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),轉染原位胰腺癌BxPC-3細胞,以熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的錶達,RT-PCR法檢測轉染細胞中hIL-18錶達水平.結果:(1)五種重組質粒經酶切與測序證實構建成功；(2)BxPC-3細胞轉染重組質粒後可觀察到綠色熒光蛋白的錶達.結論:(1)成功構建瞭hIL-18五種異構體的綠色熒光蛋白錶達載體；(2)改建的hIL-18蛋白可與綠色熒光蛋白在BxPC-3細胞融閤錶達.
목적:설계획득5단hIL-18이구체,정향삽입pEGFP-C1질립형성융합기인,전염이선암Bx-PC-3세포병표체,위진일보연구개건적hIL-18단백공능전정실험기출.방법:설계인물종pGEM-T-hIL-18질립중PCR확증득도5단불동적hIL-18편단,분별련접입pEGFP-C1재체구건불동적돌변자(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3화Mu4),전염원위이선암BxPC-3세포,이형광현미경관찰록색형광단백적표체,RT-PCR법검측전염세포중hIL-18표체수평.결과:(1)오충중조질립경매절여측서증실구건성공；(2)BxPC-3세포전염중조질립후가관찰도록색형광단백적표체.결론:(1)성공구건료hIL-18오충이구체적록색형광단백표체재체；(2)개건적hIL-18단백가여록색형광단백재BxPC-3세포융합표체.
