中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2012年
3期
12-16
,共5页
包新奇%黄绍华%刘巧荣%孙明%杨璐%申屠芬琴%康立平%陈西钊
包新奇%黃紹華%劉巧榮%孫明%楊璐%申屠芬琴%康立平%陳西釗
포신기%황소화%류교영%손명%양로%신도분금%강립평%진서쇠
PRV%gB%分段表达%ELISA
PRV%gB%分段錶達%ELISA
PRV%gB%분단표체%ELISA
目的 分段表达伪狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗体评估试剂盒研究.方法 分析gB抗原表位,设计4对特异性引物,从PRV新疆分离株中扩增gB基因的4个片段,分别命名为gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,克隆到pGEM-T-easy载体并测序.再将4个gB基因片段融合到pGEX-6P-1原核表达载体中,表达并纯化.Western Blotting进行重组蛋白的抗原性检测.以纯化的重组蛋白为抗原建立间接ELISA方法,检测猪血清临床样品.结果 构建的4种表达质粒均可在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE分析,表达分子量分别为75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5表达量较高,表达产物主要存在于包涵体中.Western Bloting鉴定显示,4种融合蛋白均可被猪伪狂犬阳性血清特异识别.以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒符合率分别为40.9％、81.8％和81.8％.结论 本研究成功表达了PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重组蛋白,gB-3、gB-4和gB-5表达量较高；其中以gB-4和gB-5建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的符合率较高.
目的 分段錶達偽狂犬病毒( pseudorabies virus,PRV)gB基因,用于PRV疫苗免疫抗體評估試劑盒研究.方法 分析gB抗原錶位,設計4對特異性引物,從PRV新疆分離株中擴增gB基因的4箇片段,分彆命名為gB-1、gB-3、gB-4和gB-5基因,剋隆到pGEM-T-easy載體併測序.再將4箇gB基因片段融閤到pGEX-6P-1原覈錶達載體中,錶達併純化.Western Blotting進行重組蛋白的抗原性檢測.以純化的重組蛋白為抗原建立間接ELISA方法,檢測豬血清臨床樣品.結果 構建的4種錶達質粒均可在大腸桿菌中錶達,經SDS-PAGE分析,錶達分子量分彆為75.05、53.86、49.96和49.72×103Da,其中gB-3、gB-4和gB-5錶達量較高,錶達產物主要存在于包涵體中.Western Bloting鑒定顯示,4種融閤蛋白均可被豬偽狂犬暘性血清特異識彆.以gB-3、gB-4和gB-5建立的ELISA方法與IDEXX公司的gB-ELISA試劑盒符閤率分彆為40.9％、81.8％和81.8％.結論 本研究成功錶達瞭PRV的gB-1、gB-3、gB-4和gB-5重組蛋白,gB-3、gB-4和gB-5錶達量較高；其中以gB-4和gB-5建立的間接ELISA方法與IDEXX公司的符閤率較高.
목적 분단표체위광견병독( pseudorabies virus,PRV)gB기인,용우PRV역묘면역항체평고시제합연구.방법 분석gB항원표위,설계4대특이성인물,종PRV신강분리주중확증gB기인적4개편단,분별명명위gB-1、gB-3、gB-4화gB-5기인,극륭도pGEM-T-easy재체병측서.재장4개gB기인편단융합도pGEX-6P-1원핵표체재체중,표체병순화.Western Blotting진행중조단백적항원성검측.이순화적중조단백위항원건립간접ELISA방법,검측저혈청림상양품.결과 구건적4충표체질립균가재대장간균중표체,경SDS-PAGE분석,표체분자량분별위75.05、53.86、49.96화49.72×103Da,기중gB-3、gB-4화gB-5표체량교고,표체산물주요존재우포함체중.Western Bloting감정현시,4충융합단백균가피저위광견양성혈청특이식별.이gB-3、gB-4화gB-5건립적ELISA방법여IDEXX공사적gB-ELISA시제합부합솔분별위40.9％、81.8％화81.8％.결론 본연구성공표체료PRV적gB-1、gB-3、gB-4화gB-5중조단백,gB-3、gB-4화gB-5표체량교고；기중이gB-4화gB-5건립적간접ELISA방법여IDEXX공사적부합솔교고.
