CAJ | 학술논문

目的采用完整的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽.方法Hep-2细胞培养RSV,采用蔗糖密度梯度(30%、45%、60%)和超滤离心纯化病毒.病毒用生物素标记后,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选.经过3轮淘筛后,ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力,通过TCID5o检测其抗病毒复制能力.选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序,据此推导多肽的氨基酸序列.结果经鉴定得到13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合,其中3个克隆体外能明显抑制RSV的复制,使TCID5o由10-8.1SFU/m1分别降至10-4.1、10-4.3、10-3.8SFU/ml.DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列,但普遍含有较多的脯氨酸.结论通过噬菌体肽库能够筛选到抗病毒作用的阳性克隆,为进一步开发高效RSV的诊断和治疗试剂奠定基础.
목적채용완정적호흡도합포병독(respiratory syncytial virus,RSV)과립사선서균체태고,이획득능고친화력결합병능억제해병독복제적특이성다태.방법Hep-2세포배양RSV,채용자당밀도제도(30%、45%、60%)화초려리심순화병독.병독용생물소표기후,응용M13서균체PⅢ정현수궤7태고진행사선.경과3륜도사후,ELISA진일보감정서균체극륭여RSV적친화력,통과TCID5o검측기항병독복제능력.선취여RSV구유고친화력적양성극륭진행DNA측서,거차추도다태적안기산서렬.결과경감정득도13개양성서균체극륭능여RSV정고친화력결합,기중3개극륭체외능명현억제RSV적복제,사TCID5o유10-8.1SFU/m1분별강지10-4.1、10-4.3、10-3.8SFU/ml.DNA측서발현각개극륭지간결핍명현적동원서렬,단보편함유교다적포안산.결론통과서균체태고능구사선도항병독작용적양성극륭,위진일보개발고효RSV적진단화치료시제전정기출.