眼科研究
眼科研究
안과연구
CHINESE OPHTHALMIC RESEARCH
2009年
5期
364-367
,共4页
周炼红%朱祥祥%邢怡桥%陈希
週煉紅%硃祥祥%邢怡橋%陳希
주련홍%주상상%형이교%진희
重组腺相关病毒%绿色荧光蛋白%穿透角膜移植%基因转染
重組腺相關病毒%綠色熒光蛋白%穿透角膜移植%基因轉染
중조선상관병독%록색형광단백%천투각막이식%기인전염
目的 研究穿透角膜移植术(PKP)后重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)在大鼠植片中的转染及表达情况.方法 建立32只大鼠穿透角膜移植的动物模型,SD大鼠作为受体,Wistar大鼠作为供体,供体植片置于含1010μg/mL(病毒基因组数/mL)rAAV-GFP的DMEM/F12 1:1混合培养液中培养30min.按照不同的观察时间点用抽签法将角膜移植术后的大鼠随机分成4组,每组8只.手术后隔日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片的存活情况.于角膜移植术后1、2、4、12周取各组眼球在共焦显微镜下观察角膜组织中GFP的表达情况,Infinity-capt软件测量角膜植片内皮层中荧光的表达强度.结果 各组中选取的受体角膜植片无水肿、混浊、新生血管及其他并发症发生.GFP基因表达阳性的角膜内皮细胞呈绿色荧光.各组角膜内皮细胞绿色荧光强度与背景亮度比值,A组:91.83±10.83;B组:128.67±4.32;C组:117.33±3.01;D组:118.50±3.02,转染后1周即有明显表达,4周及12周组较1周组强(P＜0.01),2周组强度最高(P＜0.01).结论 通过共培养的方法,rAAV-GFP能够有效地转染到角膜内皮细胞中.PKP后GFP基因能够持续、高效、稳定地在移植片的角膜内皮细胞中表达.
目的 研究穿透角膜移植術(PKP)後重組腺相關病毒(rAAV)載體介導的綠色熒光蛋白(GFP)在大鼠植片中的轉染及錶達情況.方法 建立32隻大鼠穿透角膜移植的動物模型,SD大鼠作為受體,Wistar大鼠作為供體,供體植片置于含1010μg/mL(病毒基因組數/mL)rAAV-GFP的DMEM/F12 1:1混閤培養液中培養30min.按照不同的觀察時間點用抽籤法將角膜移植術後的大鼠隨機分成4組,每組8隻.手術後隔日在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜植片的存活情況.于角膜移植術後1、2、4、12週取各組眼毬在共焦顯微鏡下觀察角膜組織中GFP的錶達情況,Infinity-capt軟件測量角膜植片內皮層中熒光的錶達彊度.結果 各組中選取的受體角膜植片無水腫、混濁、新生血管及其他併髮癥髮生.GFP基因錶達暘性的角膜內皮細胞呈綠色熒光.各組角膜內皮細胞綠色熒光彊度與揹景亮度比值,A組:91.83±10.83;B組:128.67±4.32;C組:117.33±3.01;D組:118.50±3.02,轉染後1週即有明顯錶達,4週及12週組較1週組彊(P＜0.01),2週組彊度最高(P＜0.01).結論 通過共培養的方法,rAAV-GFP能夠有效地轉染到角膜內皮細胞中.PKP後GFP基因能夠持續、高效、穩定地在移植片的角膜內皮細胞中錶達.
목적 연구천투각막이식술(PKP)후중조선상관병독(rAAV)재체개도적록색형광단백(GFP)재대서식편중적전염급표체정황.방법 건립32지대서천투각막이식적동물모형,SD대서작위수체,Wistar대서작위공체,공체식편치우함1010μg/mL(병독기인조수/mL)rAAV-GFP적DMEM/F12 1:1혼합배양액중배양30min.안조불동적관찰시간점용추첨법장각막이식술후적대서수궤분성4조,매조8지.수술후격일재렬극등현미경하관찰각막식편적존활정황.우각막이식술후1、2、4、12주취각조안구재공초현미경하관찰각막조직중GFP적표체정황,Infinity-capt연건측량각막식편내피층중형광적표체강도.결과 각조중선취적수체각막식편무수종、혼탁、신생혈관급기타병발증발생.GFP기인표체양성적각막내피세포정록색형광.각조각막내피세포록색형광강도여배경량도비치,A조:91.83±10.83;B조:128.67±4.32;C조:117.33±3.01;D조:118.50±3.02,전염후1주즉유명현표체,4주급12주조교1주조강(P＜0.01),2주조강도최고(P＜0.01).결론 통과공배양적방법,rAAV-GFP능구유효지전염도각막내피세포중.PKP후GFP기인능구지속、고효、은정지재이식편적각막내피세포중표체.
