云南畜牧兽医
雲南畜牧獸醫
운남축목수의
YUNNAN JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
2011年
6期
22-24
,共3页
柔嫩艾美耳球虫%表面抗原%SAG7%原核表达
柔嫩艾美耳毬蟲%錶麵抗原%SAG7%原覈錶達
유눈애미이구충%표면항원%SAG7%원핵표체
应用RT—PCR方法从柔嫩艾美耳球虫杨陵株的第二代裂殖子总RNA扩增出表面抗原SAG7的基因序列，并将其克隆至pGEM—T easy载体转化DH5a菌中。再用一对特异性引物扩增出N端不含信号肽序列的SAG7基因，经BamHⅠ和胁以Ⅲ双酶切后与同样双酶切的PET-32a（＋）连接并转化大肠埃希氏菌BL21（DE3），用PCR方法和双酶切筛选阳性克隆并测序，验证读码框是否正确。将筛选的阳性克隆菌经IPTG诱导。获得了SAG7重组抗原在大肠埃希氏菌中的高效表达，表达量占菌体总蛋白的50％以上，融合蛋白的分子量约为45kDa。菌体经超声裂解后经SDS—PAGE分析，重组抗原是以包涵体形式存在。’
應用RT—PCR方法從柔嫩艾美耳毬蟲楊陵株的第二代裂殖子總RNA擴增齣錶麵抗原SAG7的基因序列，併將其剋隆至pGEM—T easy載體轉化DH5a菌中。再用一對特異性引物擴增齣N耑不含信號肽序列的SAG7基因，經BamHⅠ和脅以Ⅲ雙酶切後與同樣雙酶切的PET-32a（＋）連接併轉化大腸埃希氏菌BL21（DE3），用PCR方法和雙酶切篩選暘性剋隆併測序，驗證讀碼框是否正確。將篩選的暘性剋隆菌經IPTG誘導。穫得瞭SAG7重組抗原在大腸埃希氏菌中的高效錶達，錶達量佔菌體總蛋白的50％以上，融閤蛋白的分子量約為45kDa。菌體經超聲裂解後經SDS—PAGE分析，重組抗原是以包涵體形式存在。’
응용RT—PCR방법종유눈애미이구충양릉주적제이대렬식자총RNA확증출표면항원SAG7적기인서렬，병장기극륭지pGEM—T easy재체전화DH5a균중。재용일대특이성인물확증출N단불함신호태서렬적SAG7기인，경BamHⅠ화협이Ⅲ쌍매절후여동양쌍매절적PET-32a（＋）련접병전화대장애희씨균BL21（DE3），용PCR방법화쌍매절사선양성극륭병측서，험증독마광시부정학。장사선적양성극륭균경IPTG유도。획득료SAG7중조항원재대장애희씨균중적고효표체，표체량점균체총단백적50％이상，융합단백적분자량약위45kDa。균체경초성렬해후경SDS—PAGE분석，중조항원시이포함체형식존재。’
