医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2012年
1期
19-23
,共5页
赵忠亮%赵吉成%代辉%沈翊琲%张业
趙忠亮%趙吉成%代輝%瀋翊琲%張業
조충량%조길성%대휘%침익배%장업
组蛋白%ACF%NAP -1%染色质组装
組蛋白%ACF%NAP -1%染色質組裝
조단백%ACF%NAP -1%염색질조장
目的 提取并纯化真核细胞核内组蛋白,表达并纯化重组组蛋白、染色质组装相关因子NAP-1(nuc1ear assembly protein -1)及ACF( ATP - utilizing chromatin assembly and remodeling factor),并建立无细胞体外染色质组装体系.方法 在大肠杆菌BL21中表达并应用离子交换层析纯化组蛋白,从真核细胞HeLa细胞核中提取并应用羟基磷灰石纯化组蛋白八聚体,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞Sf9中表达并纯化组装相关因子,应用纯化得到的蛋白在适宜条件下进行染色质体外组装,并用微球菌核酸酶酶切检测.结果 获得了高纯度的原核表达的组蛋白,真核细胞组蛋白八聚体及组蛋白特异伴侣NAP -1和ACF；建立了由质粒DNA、纯化的真核细胞核内重组组蛋白、重组NAP-1、重组ACF及ATP为核心成分的体外染色质组装的无细胞系统,经微球菌核酸酶检测组装成功.结论 利用体外分离纯化的多种重组蛋白,可成功构建基因的染色质模板,为在体外染色质模板上进行基因转录的调控机制研究奠定了基础.
目的 提取併純化真覈細胞覈內組蛋白,錶達併純化重組組蛋白、染色質組裝相關因子NAP-1(nuc1ear assembly protein -1)及ACF( ATP - utilizing chromatin assembly and remodeling factor),併建立無細胞體外染色質組裝體繫.方法 在大腸桿菌BL21中錶達併應用離子交換層析純化組蛋白,從真覈細胞HeLa細胞覈中提取併應用羥基燐灰石純化組蛋白八聚體,利用桿狀病毒錶達繫統在昆蟲細胞Sf9中錶達併純化組裝相關因子,應用純化得到的蛋白在適宜條件下進行染色質體外組裝,併用微毬菌覈痠酶酶切檢測.結果 穫得瞭高純度的原覈錶達的組蛋白,真覈細胞組蛋白八聚體及組蛋白特異伴侶NAP -1和ACF；建立瞭由質粒DNA、純化的真覈細胞覈內重組組蛋白、重組NAP-1、重組ACF及ATP為覈心成分的體外染色質組裝的無細胞繫統,經微毬菌覈痠酶檢測組裝成功.結論 利用體外分離純化的多種重組蛋白,可成功構建基因的染色質模闆,為在體外染色質模闆上進行基因轉錄的調控機製研究奠定瞭基礎.
목적 제취병순화진핵세포핵내조단백,표체병순화중조조단백、염색질조장상관인자NAP-1(nuc1ear assembly protein -1)급ACF( ATP - utilizing chromatin assembly and remodeling factor),병건립무세포체외염색질조장체계.방법 재대장간균BL21중표체병응용리자교환층석순화조단백,종진핵세포HeLa세포핵중제취병응용간기린회석순화조단백팔취체,이용간상병독표체계통재곤충세포Sf9중표체병순화조장상관인자,응용순화득도적단백재괄의조건하진행염색질체외조장,병용미구균핵산매매절검측.결과 획득료고순도적원핵표체적조단백,진핵세포조단백팔취체급조단백특이반려NAP -1화ACF；건립료유질립DNA、순화적진핵세포핵내중조조단백、중조NAP-1、중조ACF급ATP위핵심성분적체외염색질조장적무세포계통,경미구균핵산매검측조장성공.결론 이용체외분리순화적다충중조단백,가성공구건기인적염색질모판,위재체외염색질모판상진행기인전록적조공궤제연구전정료기출.
