中国医药指南
中國醫藥指南
중국의약지남
CHINA MEDICINE GUIDE
2012年
4期
1-3,5
,共4页
丛珊%张阳%张竹君%易维京%陈安%胡川闽%余晓东%李淑慧
叢珊%張暘%張竹君%易維京%陳安%鬍川閩%餘曉東%李淑慧
총산%장양%장죽군%역유경%진안%호천민%여효동%리숙혜
心脏型脂肪酸结合蛋白%表达载体构建%表达%纯化
心髒型脂肪痠結閤蛋白%錶達載體構建%錶達%純化
심장형지방산결합단백%표체재체구건%표체%순화
目的 构建H-FABP 高效原核表达载体,并实现H-FABP 的高效原核表达、纯化及多克隆抗体的制备.方法 通过RT-PCR 扩增人H-FABP 的基因序列,将目的 基因克隆入质粒pET28a 构建原核表达重组质粒pET28a-H-FABP.将重组质粒转化入大肠杆菌BL21 中,通过IPTG 诱导H-FABP 的表达,采用Q Sepharose F.F.阴离子层析柱等方法建立H-FABP 的纯化工艺.用免疫胶体金法和Western blot 鉴定纯化后重组蛋白免疫特异性,用重组表达蛋白制备兔抗H-FABP 多克隆抗体.结果 成功构建人H-FABP 重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为15kD,与预期一致.亲和层析纯化产物的SDS-PAGE 和Western blotting 鉴定表明获得纯度＞95%的目的 重组蛋白.制备的抗H-FABP 多克隆抗体的抗血清ELISA 效价可达1:512000.结论 本研究在原核系统中成功表达了H-FABP重组蛋白,并制备多克隆抗体,为H-FABP 的结构和功能研究及开发临床诊断试剂盒打下了基础.
目的 構建H-FABP 高效原覈錶達載體,併實現H-FABP 的高效原覈錶達、純化及多剋隆抗體的製備.方法 通過RT-PCR 擴增人H-FABP 的基因序列,將目的 基因剋隆入質粒pET28a 構建原覈錶達重組質粒pET28a-H-FABP.將重組質粒轉化入大腸桿菌BL21 中,通過IPTG 誘導H-FABP 的錶達,採用Q Sepharose F.F.陰離子層析柱等方法建立H-FABP 的純化工藝.用免疫膠體金法和Western blot 鑒定純化後重組蛋白免疫特異性,用重組錶達蛋白製備兔抗H-FABP 多剋隆抗體.結果 成功構建人H-FABP 重組蛋白原覈錶達載體,重組蛋白以包涵體形式錶達,其相對分子質量為15kD,與預期一緻.親和層析純化產物的SDS-PAGE 和Western blotting 鑒定錶明穫得純度＞95%的目的 重組蛋白.製備的抗H-FABP 多剋隆抗體的抗血清ELISA 效價可達1:512000.結論 本研究在原覈繫統中成功錶達瞭H-FABP重組蛋白,併製備多剋隆抗體,為H-FABP 的結構和功能研究及開髮臨床診斷試劑盒打下瞭基礎.
목적 구건H-FABP 고효원핵표체재체,병실현H-FABP 적고효원핵표체、순화급다극륭항체적제비.방법 통과RT-PCR 확증인H-FABP 적기인서렬,장목적 기인극륭입질립pET28a 구건원핵표체중조질립pET28a-H-FABP.장중조질립전화입대장간균BL21 중,통과IPTG 유도H-FABP 적표체,채용Q Sepharose F.F.음리자층석주등방법건립H-FABP 적순화공예.용면역효체금법화Western blot 감정순화후중조단백면역특이성,용중조표체단백제비토항H-FABP 다극륭항체.결과 성공구건인H-FABP 중조단백원핵표체재체,중조단백이포함체형식표체,기상대분자질량위15kD,여예기일치.친화층석순화산물적SDS-PAGE 화Western blotting 감정표명획득순도＞95%적목적 중조단백.제비적항H-FABP 다극륭항체적항혈청ELISA 효개가체1:512000.결론 본연구재원핵계통중성공표체료H-FABP중조단백,병제비다극륭항체,위H-FABP 적결구화공능연구급개발림상진단시제합타하료기출.
