西北农业学报
西北農業學報
서북농업학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-OCCIDENTALIS SINICA
2011年
5期
139-143
,共5页
茶树%咖啡酸氧甲基转移酶%RACE%原核表达
茶樹%咖啡痠氧甲基轉移酶%RACE%原覈錶達
다수%가배산양갑기전이매%RACE%원핵표체
以从茶树叶子中提取的总RNA为模板,结合RT-PCR利用RACE技术,得到咖啡酸氧甲基转移酶(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)基因全长1 381 bp,其开放阅读框为1092 bp,编码393个氨基酸,推测的蛋白分子量约为39.661 9 ku,理论等电点为5.66,在GenBank的登录号为HM204933.其核苷酸序列与欧洲白桦、苎麻、中果咖啡和毛果杨的COMT基因相似性分别为80%、78%、77%、77%,氨基酸序列与毛果杨的COMT基因达100%.将该基因重组到表达载体pET-32a(+)中进行原核表达,经IPTG诱导,SDSPAGE检测结果表明茶树COMT基因能在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,电泳检测到一条大约60 ku的外源蛋白,与预测的融合蛋白分子量相符.
以從茶樹葉子中提取的總RNA為模闆,結閤RT-PCR利用RACE技術,得到咖啡痠氧甲基轉移酶(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)基因全長1 381 bp,其開放閱讀框為1092 bp,編碼393箇氨基痠,推測的蛋白分子量約為39.661 9 ku,理論等電點為5.66,在GenBank的登錄號為HM204933.其覈苷痠序列與歐洲白樺、苧痳、中果咖啡和毛果楊的COMT基因相似性分彆為80%、78%、77%、77%,氨基痠序列與毛果楊的COMT基因達100%.將該基因重組到錶達載體pET-32a(+)中進行原覈錶達,經IPTG誘導,SDSPAGE檢測結果錶明茶樹COMT基因能在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,電泳檢測到一條大約60 ku的外源蛋白,與預測的融閤蛋白分子量相符.
이종다수협자중제취적총RNA위모판,결합RT-PCR이용RACE기술,득도가배산양갑기전이매(caffeic acid o-methyltransferase,COMT)기인전장1 381 bp,기개방열독광위1092 bp,편마393개안기산,추측적단백분자량약위39.661 9 ku,이론등전점위5.66,재GenBank적등록호위HM204933.기핵감산서렬여구주백화、저마、중과가배화모과양적COMT기인상사성분별위80%、78%、77%、77%,안기산서렬여모과양적COMT기인체100%.장해기인중조도표체재체pET-32a(+)중진행원핵표체,경IPTG유도,SDSPAGE검측결과표명다수COMT기인능재대장간균BL21(DE3)중표체,전영검측도일조대약60 ku적외원단백,여예측적융합단백분자량상부.
