南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2011年
2期
234-238
,共5页
孙鹏宇%张艳玲%荆玉明%张信基%张哲欢%黎诚耀%陈白虹%谭万龙%李红卫
孫鵬宇%張豔玲%荊玉明%張信基%張哲歡%黎誠耀%陳白虹%譚萬龍%李紅衛
손붕우%장염령%형옥명%장신기%장철환%려성요%진백홍%담만룡%리홍위
腺病毒%病毒滴度测定%壳蛋白免疫法%绿色荧光蛋白%荧光定量PCR%细胞病变法
腺病毒%病毒滴度測定%殼蛋白免疫法%綠色熒光蛋白%熒光定量PCR%細胞病變法
선병독%병독적도측정%각단백면역법%록색형광단백%형광정량PCR%세포병변법
目的 将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点.方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究.结果 绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P＞0.1).荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P＜0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍.OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性.结论 绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力.荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性.
目的 將目前測定腺病毒滴度常用的OD260法、熒光定量PCR法、綠色熒光蛋白標記法、殼蛋白免疫法、細胞病變(CPE)法進行比較研究,分析和討論各種方法的優缺點.方法 4種重組腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)擴增、純化後,同時分彆用OD260值法、熒光定量PCR法、綠色熒光蛋白標記法、殼蛋白免疫法及CPE法測定病毒滴度,併以殼蛋白免疫法測定結果作為標準,對各種方法所得結果進行比較研究.結果 綠色熒光蛋白標記法、CPE法與殼蛋白免疫法同時測定4種腺病毒滴度,其結果無統計學差異(P＞0.1).熒光定量PCR法測定值明顯高于殼蛋白免疫法(P＜0.05),但與該法測定結果間存在良好的相關性(r=0.965),約為殼蛋白免疫法所測得結果的10倍.OD260法測得結果與殼蛋白免疫法測得結果間則無相關性.結論 綠色熒光蛋白標記法與殼蛋白免疫法是測定腺病毒感染性滴度最為快速有效的方法,其結果客觀可靠,能真實地反映病毒的實際感染力.熒光定量PCR法測定結果反映的是完整的病毒顆粒數,能夠間接反映病毒的感染力,且該方法操作簡單,耗時短,同樣有較高的實用性.
목적 장목전측정선병독적도상용적OD260법、형광정량PCR법、록색형광단백표기법、각단백면역법、세포병변(CPE)법진행비교연구,분석화토론각충방법적우결점.방법 4충중조선병독(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP화Ad-CBA-GFP)확증、순화후,동시분별용OD260치법、형광정량PCR법、록색형광단백표기법、각단백면역법급CPE법측정병독적도,병이각단백면역법측정결과작위표준,대각충방법소득결과진행비교연구.결과 록색형광단백표기법、CPE법여각단백면역법동시측정4충선병독적도,기결과무통계학차이(P＞0.1).형광정량PCR법측정치명현고우각단백면역법(P＜0.05),단여해법측정결과간존재량호적상관성(r=0.965),약위각단백면역법소측득결과적10배.OD260법측득결과여각단백면역법측득결과간칙무상관성.결론 록색형광단백표기법여각단백면역법시측정선병독감염성적도최위쾌속유효적방법,기결과객관가고,능진실지반영병독적실제감염력.형광정량PCR법측정결과반영적시완정적병독과립수,능구간접반영병독적감염력,차해방법조작간단,모시단,동양유교고적실용성.
