军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2011年
4期
262-267
,共6页
彭剑淳%高博%贾帅争%樊炜%詹林盛
彭劍淳%高博%賈帥爭%樊煒%詹林盛
팽검순%고박%가수쟁%번위%첨림성
生物素化作用%真核表达载体%pHAVI%印迹法%蛋白质%pull down
生物素化作用%真覈錶達載體%pHAVI%印跡法%蛋白質%pull down
생물소화작용%진핵표체재체%pHAVI%인적법%단백질%pull down
目的 构建生物素化标签真核表达载体,利用生物素化蛋白检测快速、灵敏、简便的特点,对传统的Western印迹和pull down技术进行改进和优化.方法 利用pCI neo载体骨架构建生物素化真核表达载体.将红色荧光蛋白插入表达载体,用辣根过氧化物酶标记的链亲和素对融合蛋白进行Western印迹检测;将萤火虫荧光素酶插入表达载体,利用pull down技术定量分析生物素化效率;将丙型肝炎病毒NS4B蛋白插入表达载体,通过pulldown技术研究丙型肝炎病毒NS4B蛋白的蛋白质问相互作用.结果 构建的生物素标签真核表达载体能使目的 蛋白生物素化.报告基因定量分析结果表明目的 蛋白生物素化效率达72%.将该载体表达的融合蛋白应用于Western印迹和pull down技术中可实现无需特异性抗体的一步法快速检测.结论 将生物素化标签真核表达载体用于Western印迹和pull down技术,建立了快速、灵敏、简便的融合蛋白质检测新方法,为生命科学领域提供了一种有利的研究工具和通用技术平台.
目的 構建生物素化標籤真覈錶達載體,利用生物素化蛋白檢測快速、靈敏、簡便的特點,對傳統的Western印跡和pull down技術進行改進和優化.方法 利用pCI neo載體骨架構建生物素化真覈錶達載體.將紅色熒光蛋白插入錶達載體,用辣根過氧化物酶標記的鏈親和素對融閤蛋白進行Western印跡檢測;將螢火蟲熒光素酶插入錶達載體,利用pull down技術定量分析生物素化效率;將丙型肝炎病毒NS4B蛋白插入錶達載體,通過pulldown技術研究丙型肝炎病毒NS4B蛋白的蛋白質問相互作用.結果 構建的生物素標籤真覈錶達載體能使目的 蛋白生物素化.報告基因定量分析結果錶明目的 蛋白生物素化效率達72%.將該載體錶達的融閤蛋白應用于Western印跡和pull down技術中可實現無需特異性抗體的一步法快速檢測.結論 將生物素化標籤真覈錶達載體用于Western印跡和pull down技術,建立瞭快速、靈敏、簡便的融閤蛋白質檢測新方法,為生命科學領域提供瞭一種有利的研究工具和通用技術平檯.
목적 구건생물소화표첨진핵표체재체,이용생물소화단백검측쾌속、령민、간편적특점,대전통적Western인적화pull down기술진행개진화우화.방법 이용pCI neo재체골가구건생물소화진핵표체재체.장홍색형광단백삽입표체재체,용랄근과양화물매표기적련친화소대융합단백진행Western인적검측;장형화충형광소매삽입표체재체,이용pull down기술정량분석생물소화효솔;장병형간염병독NS4B단백삽입표체재체,통과pulldown기술연구병형간염병독NS4B단백적단백질문상호작용.결과 구건적생물소표첨진핵표체재체능사목적 단백생물소화.보고기인정량분석결과표명목적 단백생물소화효솔체72%.장해재체표체적융합단백응용우Western인적화pull down기술중가실현무수특이성항체적일보법쾌속검측.결론 장생물소화표첨진핵표체재체용우Western인적화pull down기술,건립료쾌속、령민、간편적융합단백질검측신방법,위생명과학영역제공료일충유리적연구공구화통용기술평태.
