中国分子心脏病学杂志
中國分子心髒病學雜誌
중국분자심장병학잡지
MOLECULAR CARDIOLOGY OF CHINA
2008年
6期
337-340
,共4页
沈秀张%林吉进%武君%黄瑞燕%刘树楷%李妍妍
瀋秀張%林吉進%武君%黃瑞燕%劉樹楷%李妍妍
침수장%림길진%무군%황서연%류수해%리연연
FHL2%谷胱甘肽-S-转移酶%融合蛋白%原核表达%纯化
FHL2%穀胱甘肽-S-轉移酶%融閤蛋白%原覈錶達%純化
FHL2%곡광감태-S-전이매%융합단백%원핵표체%순화
目的 高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白.方法 (1)PCR法扩增FHL2(Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EeoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-FHL2在大肠杆菌BL21(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;(3)超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-FHL2融合蛋白;(4)通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-FHL2的表达.结果 (1)成功构建pGEX-4t-l-FHL2重组质粒,测序结果证明FHL2与载体的GST在同一读框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的条件下能诱导可溶性GST-FHL2融合蛋白高效表达;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-FHL2的分子量相符.结论 正确构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-FHL2融合蛋白,经谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性GST-FHL2融合蛋白.
目的 高效錶達和純化可溶性GST-FHL2融閤蛋白.方法 (1)PCR法擴增FHL2(Four and a half LIM domains 2)基因的編碼片段,分彆在5'耑和3'耑加上EeoR I和Xho l酶切位點,併剋隆進入原覈錶達載體pGEX-4T-1;(2)利用異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導重組質粒pGEX-4T-1-FHL2在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達同時帶有穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)標籤的融閤蛋白;(3)超聲法裂解大腸桿菌,應用穀胱苷肽瓊脂糖樹脂純化可溶的GST-FHL2融閤蛋白;(4)通過SDS-PAGE和Western blot驗證GST-FHL2的錶達.結果 (1)成功構建pGEX-4t-l-FHL2重組質粒,測序結果證明FHL2與載體的GST在同一讀框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的條件下能誘導可溶性GST-FHL2融閤蛋白高效錶達;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST單剋隆抗體特異性識彆,條帶所在位置和GST-FHL2的分子量相符.結論 正確構建pGEX-4T-1-FHL2重組質粒,在大腸桿菌BL21中高效錶達GST-FHL2融閤蛋白,經穀胱苷肽瓊脂糖樹脂純化得到高純度的可溶性GST-FHL2融閤蛋白.
목적 고효표체화순화가용성GST-FHL2융합단백.방법 (1)PCR법확증FHL2(Four and a half LIM domains 2)기인적편마편단,분별재5'단화3'단가상EeoR I화Xho l매절위점,병극륭진입원핵표체재체pGEX-4T-1;(2)이용이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도중조질립pGEX-4T-1-FHL2재대장간균BL21(DE3)중표체동시대유곡광감태-S-전이매(GST)표첨적융합단백;(3)초성법렬해대장간균,응용곡광감태경지당수지순화가용적GST-FHL2융합단백;(4)통과SDS-PAGE화Western blot험증GST-FHL2적표체.결과 (1)성공구건pGEX-4t-l-FHL2중조질립,측서결과증명FHL2여재체적GST재동일독광;(2)0.1 mmol/L적IPTG재23℃적조건하능유도가용성GST-FHL2융합단백고효표체;(3)재Western blot분석중,GST-FHL2능피서항GST단극륭항체특이성식별,조대소재위치화GST-FHL2적분자량상부.결론 정학구건pGEX-4T-1-FHL2중조질립,재대장간균BL21중고효표체GST-FHL2융합단백,경곡광감태경지당수지순화득도고순도적가용성GST-FHL2융합단백.
