CAJ | 학술논문

背景:内皮细胞和平滑肌细胞的相瓦调节是稳定血管壁结构的关键因素,两者共同培养能够分别影响各自的形态和功能.目的:利用Ⅰ型胶原浮胶建立人脐静脉内皮细胞与人血管平滑肌细胞共培养体系,分析细胞之间的相互作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-10/2008-01在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意.方法:取新鲜脐带,利用胶原酶灌注法分离人脐静脉内皮细胞,组织块培养法分离人血管平滑肌细胞.人血管平滑肌细胞直接种植十培养板表面,人脐静脉内皮细胞种植十鼠尾Ⅰ型胶原表面制成胶原浮胶,并与培养板上的人血管平滑肌细胞共培养.以人脐静脉内皮细胞单独在浮胶底面培养,培养板表面无人血管平滑肌细胞为对照.主要观察指标:①免疫荧光方法鉴定人血管平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞.光镜和电镜观察人脐静脉内皮细胞形态.②反转录一聚合酶链反应进行基因表达分析.结果:原代培养的内皮细胞呈铺路石样形态,CD31染色阳性.原代培养的人血管平滑肌细胞免疫荧光染色a-SMA呈阳性.胶原支架上内皮细胞伸展,胶原纤维重新排列,24h后出现管腔样结构.在共培养体系中,人脐静脉内皮细胞的金属蛋白酶1和金属蛋白酶9基因表达量显著高于单独培养组人脐静脉内皮细胞的表达量(P<0.05).但层枯蛋白Y2 和组织因子途径抑制物2的基因相对表达量在两组间末见明显变化. 结论:实验建市的共培养体系,可以观察到与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞形成更加丰富的网络状管腔样结构,更易于血管结构的形成.
배경:내피세포화평활기세포적상와조절시은정혈관벽결구적관건인소,량자공동배양능구분별영향각자적형태화공능.목적:이용Ⅰ형효원부효건립인제정맥내피세포여인혈관평활기세포공배양체계,분석세포지간적상호작용.설계、시간급지점:단일양본관찰,우2006-10/2008-01재복단대학상해의학원분자생물학실험실완성.재료:신선제대취자국제제일부영보건의원,산부지정동의.방법:취신선제대,이용효원매관주법분리인제정맥내피세포,조직괴배양법분리인혈관평활기세포.인혈관평활기세포직접충식십배양판표면,인제정맥내피세포충식십서미Ⅰ형효원표면제성효원부효,병여배양판상적인혈관평활기세포공배양.이인제정맥내피세포단독재부효저면배양,배양판표면무인혈관평활기세포위대조.주요관찰지표:①면역형광방법감정인혈관평활기세포화인제정맥내피세포.광경화전경관찰인제정맥내피세포형태.②반전록일취합매련반응진행기인표체분석.결과:원대배양적내피세포정포로석양형태,CD31염색양성.원대배양적인혈관평활기세포면역형광염색a-SMA정양성.효원지가상내피세포신전,효원섬유중신배렬,24h후출현관강양결구.재공배양체계중,인제정맥내피세포적금속단백매1화금속단백매9기인표체량현저고우단독배양조인제정맥내피세포적표체량(P<0.05).단층고단백Y2 화조직인자도경억제물2적기인상대표체량재량조간말견명현변화. 결론:실험건시적공배양체계,가이관찰도여평활기세포공배양적혈관내피세포형성경가봉부적망락상관강양결구,경역우혈관결구적형성.