CAJ | 학술논문

为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食管癌相关抗原基因进行了克隆重组并在大肠杆菌中进行了表达.对高表达的重组蛋白首先制备包涵体.然后采用Ni-Sepharose亲和层析得到初步纯化的蛋白质,最后使用SDS-PAGE制备胶电泳作进一步纯化.经过透析复性后,用于制备蛋白质芯片.采用亲和层析纯化重组蛋白,得率为71%,纯度约为70%;在SDS-PAGE制备胶进一步纯化后,得率为32%,纯度为95%,经过透析和复性后,最终得率为21%,纯度为95%.得到的重组蛋白RPS4在ELISA检测中可以和血清中识别RPS4的自身抗体起反应,并且,采用精纯抗原制备的蛋白质芯片,在检测抗原与抗体这一对反应中也具有较高的敏感性和特异性,适合大规模血清抗体的检测.研究表明,采用亲和层析结合制备凝胶电泳纯化抗原蛋白,是一条简便快捷,适合需要量不大,但对纯度要求比较高的蛋白质芯片制备的技术路线.
위료득도제비항원심편소수적고순도중조항원단백,수요건립일투괄합우다충중조항원표체화순화적기술로선.채용료친화층석결합제비효전영적방법,대16충용우구건단백질심편적식관암상관항원기인진행료극륭중조병재대장간균중진행료표체.대고표체적중조단백수선제비포함체.연후채용Ni-Sepharose친화층석득도초보순화적단백질,최후사용SDS-PAGE제비효전영작진일보순화.경과투석복성후,용우제비단백질심편.채용친화층석순화중조단백,득솔위71%,순도약위70%;재SDS-PAGE제비효진일보순화후,득솔위32%,순도위95%,경과투석화복성후,최종득솔위21%,순도위95%.득도적중조단백RPS4재ELISA검측중가이화혈청중식별RPS4적자신항체기반응,병차,채용정순항원제비적단백질심편,재검측항원여항체저일대반응중야구유교고적민감성화특이성,괄합대규모혈청항체적검측.연구표명,채용친화층석결합제비응효전영순화항원단백,시일조간편쾌첩,괄합수요량불대,단대순도요구비교고적단백질심편제비적기술로선.