神经损伤与功能重建
神經損傷與功能重建
신경손상여공능중건
NEURAL INJURY AND FUNCTIONAL RECONSTRUCTION
2008年
6期
371-373,392
,共4页
降风%王雪贞%卜碧涛%张苏明%张旻
降風%王雪貞%蔔碧濤%張囌明%張旻
강풍%왕설정%복벽도%장소명%장민
CDK4%神经系统变性疾病%RNA干扰%慢病毒载体
CDK4%神經繫統變性疾病%RNA榦擾%慢病毒載體
CDK4%신경계통변성질병%RNA간우%만병독재체
目的:探讨CDK4在神经系统变性疾病中的作用,并构建携带小鼠CDK4-siRNA的慢病毒载体进行体外研究. 方法:设计3个CDK4-siRNA序列和1个无关对照序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA载体.重组质粒经PCR和测序鉴定后,脂质体介导下转染BV-2细胞,Western blot检测CDK4的表达,筛选出干扰效果最佳的pSIH1-siRNA2.将对照序列和pSIH-siRNA2分别与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度. 结果:慢病毒感染BV-2细胞后可表达GFP,RT-PCR和Western blot检测CDK4的表达明显下降. 结论:成功构建携带CDK4-siRNA的慢病毒载体,体外研究显示其能明显下调CDK4的表达.
目的:探討CDK4在神經繫統變性疾病中的作用,併構建攜帶小鼠CDK4-siRNA的慢病毒載體進行體外研究. 方法:設計3箇CDK4-siRNA序列和1箇無關對照序列,化學閤成後退火形成雙鏈,剋隆到酶切的pSIH1-H1-copGFP siRNA載體.重組質粒經PCR和測序鑒定後,脂質體介導下轉染BV-2細胞,Western blot檢測CDK4的錶達,篩選齣榦擾效果最佳的pSIH1-siRNA2.將對照序列和pSIH-siRNA2分彆與慢病毒包裝質粒共轉染293T細胞生成病毒,收集病毒上清併濃縮,測定濃度. 結果:慢病毒感染BV-2細胞後可錶達GFP,RT-PCR和Western blot檢測CDK4的錶達明顯下降. 結論:成功構建攜帶CDK4-siRNA的慢病毒載體,體外研究顯示其能明顯下調CDK4的錶達.
목적:탐토CDK4재신경계통변성질병중적작용,병구건휴대소서CDK4-siRNA적만병독재체진행체외연구. 방법:설계3개CDK4-siRNA서렬화1개무관대조서렬,화학합성후퇴화형성쌍련,극륭도매절적pSIH1-H1-copGFP siRNA재체.중조질립경PCR화측서감정후,지질체개도하전염BV-2세포,Western blot검측CDK4적표체,사선출간우효과최가적pSIH1-siRNA2.장대조서렬화pSIH-siRNA2분별여만병독포장질립공전염293T세포생성병독,수집병독상청병농축,측정농도. 결과:만병독감염BV-2세포후가표체GFP,RT-PCR화Western blot검측CDK4적표체명현하강. 결론:성공구건휴대CDK4-siRNA적만병독재체,체외연구현시기능명현하조CDK4적표체.
