大鼠对氧磷酶1真核表达载体的构建及在体外的表达
대서대양린매1진핵표체재체적구건급재체외적표체
In Vitro Construction and Expression of Eukaryotic Expression Vector Harboring the Gene Fragment of Rat Paraoxonase 1
  • 万方数据
    医学分子生物学杂志 의학분자생물학잡지
    FOREIGN MEDICAL SCIENCES
    2008年 3期 206-209 ,共4页

    杨硕%熊盛道%熊维宁%许淑云%史雪梅%徐国鹏%兰芬%陆小霞%胡琼洁

    양석%웅성도%웅유저%허숙운%사설매%서국붕%란분%륙소하%호경길

    铜绿假单胞菌%对氧磷酶%密度感知%基因的表达与调控 銅綠假單胞菌%對氧燐酶%密度感知%基因的錶達與調控
    동록가단포균%대양린매%밀도감지%기인적표체여조공
    目的 构建大鼠对氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表达载体,并检测其在体外培养细胞中的表达及功能,为进一步探索运用其进行基因防治肺部感染奠定基础.方法 利用RT-PCR扩增大鼠PON1编码区全长序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鉴定无误后,脂质体转染A549细胞及293细胞, Western印迹检测蛋白表达,并检测其芳香酯酶活性及对铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.结果 分别从大鼠肝组织中扩增出1 153 bp片段,克隆入表达载体后进行酶切鉴定和测序结果正确.转染细胞后能够表达目的 蛋白,该蛋白具有芳香酯酶和AHLs内酯酶活性.结论 成功构建了含有大鼠PON1真核表达载体,质粒能够在真核细胞中表达,能够有效地水解铜绿假单胞菌密度感知系统信号分子.
    목적 구건대서대양린매1(paraoxonase 1,PON1)진핵표체재체,병검측기재체외배양세포중적표체급공능,위진일보탐색운용기진행기인방치폐부감염전정기출.방법 이용RT-PCR확증대서PON1편마구전장서렬,극륭입pcDNA 3.1(+),감정무오후,지질체전염A549세포급293세포, Western인적검측단백표체,병검측기방향지매활성급대동록가단포균밀도감지계통신호분자N-선기고사안산내지(N-acylhomoserine lactones,AHLs)적수해공능.결과 분별종대서간조직중확증출1 153 bp편단,극륭입표체재체후진행매절감정화측서결과정학.전염세포후능구표체목적 단백,해단백구유방향지매화AHLs내지매활성.결론 성공구건료함유대서PON1진핵표체재체,질립능구재진핵세포중표체,능구유효지수해동록가단포균밀도감지계통신호분자.
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