CAJ | 학술논문

目的探讨可溶性 HLA-G1(sHLA-G1)对人 NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系.方法 ①通过原核表达技术获得 sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定.②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30 min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组 NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组.③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5∶1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率.NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20 μg/ml的重组蛋白培养30 min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30 min).结果 ①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白.②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30 min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P＜0.05).③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P＜0.01).结论 sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制 NK-92细胞的杀伤活性.
목적 탐토가용성 HLA-G1(sHLA-G1)대인 NK-92세포살상활성적억제여세포표면면역구단백양전록분자2(ILT2)화살상세포면역구단백양수체2DL4(KIR2DL4)수체적관계.방법 ①통과원핵표체기술획득 sHLA-G1중조단백(중조단백),병채용단백질인적법진행감정.②취NK-92세포,가입종농도20μg/ml적중조단백분별배양10、30 min,재분별가입항HLA-G1/G5、항ILT2화항KIR2DL4항체,채용류식세포술검측각조 NK-92세포표면sHLA-G1화ILT2、KIR2DL4수체표체양성솔;이NK-92세포단독배양작위대조조.③이인백혈병K562세포위파세포,이경불동방식처리적NK-92세포위효응세포,효파비위5∶1,공동배양2h,채용류식세포술검측NK-92세포대K562세포적살상솔.NK-92세포처리방식위단순중조단백처리(분별가입종농도위0、10、20 μg/ml적중조단백배양30 min)화표면수체봉폐+중조단백처리(분별가입항ILT2、항KIR2DL4、항LT2+항KIR2DL4항체배양30min,재분별가입종농도위0、10、20μg/ml적중조단백배양30 min).결과 ①단백질인적분석표명소획중조단백위대유조안산표첨적특이단백.②NK-92세포여20μg/ml중조단백공배양30 min후,sHLA-G1표체양성솔명현고우이ILT2、KIR2DL4수체표체양성솔균명현저우대조조(균P＜0.05).③이종농도0、10、20μg/ml적중조단백처리적NK-92세포대K562세포적살상솔분별위39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(량량비교,균P＜0.01);단독봉폐ILT2수체,살상솔분별위23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(량량비교,균P＜0.01);단독봉폐KIR2DL4수체,살상솔분별위30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(량량비교,균P＜0.01).결론 sHLA-G1통과여NK-92세포표면ILT2화KIR2DL4수체직접결합이억제 NK-92세포적살상활성.