世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2007年
34期
3625-3628
,共4页
卢雅丕%董菁%周飞%王琳%陈美娅%廉亚美%张波%任建林
盧雅丕%董菁%週飛%王琳%陳美婭%廉亞美%張波%任建林
로아비%동정%주비%왕림%진미아%렴아미%장파%임건림
肠三叶因子%酵母双杂交载体%自激活作用
腸三葉因子%酵母雙雜交載體%自激活作用
장삼협인자%효모쌍잡교재체%자격활작용
目的:构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)酵母双杂交诱饵载体并鉴定其自激活作用.方法:从人结肠黏膜提取总RNA.RT-PCR制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因,TA克隆至pGEMT载体并测序鉴定.经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切,连接到pENTR11质粒构建入门克隆.LR反应获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-hTFF3,测序正确后与酵母双杂交空猎物载体pDEST22共同转化Mav203酵母细胞,SD/-Leu/-Trp固体培养基上生长.挑取单克隆划线接种到分别含有不同浓度氨基三唑(3AT)的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上,观察重组诱饵载体的自激活情况.结果:从人正常结肠黏膜成功克隆了hTFF3基因,构建了pDEST32-hTFF3酵母表达质粒.转化pDEST32-hTFF3和pDEST22的Mav203酵母细胞可在3AT浓度为30 mmol/L以下的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上生长,在3AT浓度为30mmol/L以上的培养基上则未见酵母细胞生长.结论:所构建的pDEST32-hTFF3可作为酵母双杂交的诱饵质粒.
目的:構建人腸三葉因子(hITF/hTFF3)酵母雙雜交誘餌載體併鑒定其自激活作用.方法:從人結腸黏膜提取總RNA.RT-PCR製備總cDNA,PCR擴增hTFF3基因,TA剋隆至pGEMT載體併測序鑒定.經NcoⅠ/XhoⅠ雙酶切,連接到pENTR11質粒構建入門剋隆.LR反應穫得酵母雙雜交誘餌載體pDEST32-hTFF3,測序正確後與酵母雙雜交空獵物載體pDEST22共同轉化Mav203酵母細胞,SD/-Leu/-Trp固體培養基上生長.挑取單剋隆劃線接種到分彆含有不同濃度氨基三唑(3AT)的SD/-Leu/-Trp/-His培養基上,觀察重組誘餌載體的自激活情況.結果:從人正常結腸黏膜成功剋隆瞭hTFF3基因,構建瞭pDEST32-hTFF3酵母錶達質粒.轉化pDEST32-hTFF3和pDEST22的Mav203酵母細胞可在3AT濃度為30 mmol/L以下的SD/-Leu/-Trp/-His培養基上生長,在3AT濃度為30mmol/L以上的培養基上則未見酵母細胞生長.結論:所構建的pDEST32-hTFF3可作為酵母雙雜交的誘餌質粒.
목적:구건인장삼협인자(hITF/hTFF3)효모쌍잡교유이재체병감정기자격활작용.방법:종인결장점막제취총RNA.RT-PCR제비총cDNA,PCR확증hTFF3기인,TA극륭지pGEMT재체병측서감정.경NcoⅠ/XhoⅠ쌍매절,련접도pENTR11질립구건입문극륭.LR반응획득효모쌍잡교유이재체pDEST32-hTFF3,측서정학후여효모쌍잡교공작물재체pDEST22공동전화Mav203효모세포,SD/-Leu/-Trp고체배양기상생장.도취단극륭화선접충도분별함유불동농도안기삼서(3AT)적SD/-Leu/-Trp/-His배양기상,관찰중조유이재체적자격활정황.결과:종인정상결장점막성공극륭료hTFF3기인,구건료pDEST32-hTFF3효모표체질립.전화pDEST32-hTFF3화pDEST22적Mav203효모세포가재3AT농도위30 mmol/L이하적SD/-Leu/-Trp/-His배양기상생장,재3AT농도위30mmol/L이상적배양기상칙미견효모세포생장.결론:소구건적pDEST32-hTFF3가작위효모쌍잡교적유이질립.
