浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2007年
6期
581-587
,共7页
刘晓艳%方红%羊正纲%张好%阮黎明%蒋筱凌
劉曉豔%方紅%羊正綱%張好%阮黎明%蔣篠凌
류효염%방홍%양정강%장호%원려명%장소릉
寡核苷酸类,反义%葡糖醛酸糖苷酶%RNA,小分子干扰%RNA干扰%乙酰肝素酶%基因表达%黑色素瘤
寡覈苷痠類,反義%葡糖醛痠糖苷酶%RNA,小分子榦擾%RNA榦擾%乙酰肝素酶%基因錶達%黑色素瘤
과핵감산류,반의%포당철산당감매%RNA,소분자간우%RNA간우%을선간소매%기인표체%흑색소류
目的:构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用.方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pRNATU6.1载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人恶性黑素瘤细胞A375,采用半定量PCR测定HPSE基因RNA水平变化,Western blot检测HPSE蛋白表达的变化.结果:将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pRNATU6.1载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染A375细胞后,半定量PCR和Western blot检测显示,HPSE基因和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制HPSE的表达.
目的:構建針對人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小榦擾RNA(siRNA)及其錶達載體,轉染細胞後觀察其對HPSE基因的榦擾作用.方法:設計HPSE靶嚮的髮夾狀siRNA,閤成兩條互補的寡覈苷痠鏈,退火後連接入pRNATU6.1載體,轉化擴增後進行序列測定.用脂質體包裹轉染人噁性黑素瘤細胞A375,採用半定量PCR測定HPSE基因RNA水平變化,Western blot檢測HPSE蛋白錶達的變化.結果:將針對HPSE基因的siRNA的雙鏈寡覈苷痠片段剋隆到pRNATU6.1載體,經過暘性菌落PCR鑒定與測序,結果正確;轉染A375細胞後,半定量PCR和Western blot檢測顯示,HPSE基因和蛋白的錶達水平明顯降低(P＜0.05).結論:成功構建瞭針對HPSE基因的siRNA載體,轉染細胞後可抑製HPSE的錶達.
목적:구건침대인을선간소매(HPSE)기인적소간우RNA(siRNA)급기표체재체,전염세포후관찰기대HPSE기인적간우작용.방법:설계HPSE파향적발협상siRNA,합성량조호보적과핵감산련,퇴화후련접입pRNATU6.1재체,전화확증후진행서렬측정.용지질체포과전염인악성흑소류세포A375,채용반정량PCR측정HPSE기인RNA수평변화,Western blot검측HPSE단백표체적변화.결과:장침대HPSE기인적siRNA적쌍련과핵감산편단극륭도pRNATU6.1재체,경과양성균락PCR감정여측서,결과정학;전염A375세포후,반정량PCR화Western blot검측현시,HPSE기인화단백적표체수평명현강저(P＜0.05).결론:성공구건료침대HPSE기인적siRNA재체,전염세포후가억제HPSE적표체.
