中国兽医寄生虫病
中國獸醫寄生蟲病
중국수의기생충병
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY
2007年
5期
1-6
,共6页
日本血吸虫%转录本组%Th细胞表位%预测%表达
日本血吸蟲%轉錄本組%Th細胞錶位%預測%錶達
일본혈흡충%전록본조%Th세포표위%예측%표체
目的 表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)转录本组中筛选获得的候选抗原基因Th细胞表位,以备免疫试验验证,为建立大规模、高通量、快速鉴定日本血吸虫Th细胞表位的方法奠定基础.方法 应用数据挖掘技术,按照序列在不同期别转录本的数量,从Feng Liu等公布的转录本组EST序列中筛选出期别差异表达基因,选择具有完整可读框的序列作为抗原候选基因,其所编码蛋白按照有无信号肽和跨膜结构分为:信号肽跨膜结构组、非信号肽、跨膜结构组序列组.对编码蛋白应用表位预测服务器PRED-BALB/c、SYFPEIT、MHCPred、Rankpep分别对I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek型MHC分子进行表位预测.各期别各组筛选出5条最优混合预测表位.选择童虫期信号肽和跨膜结构组(mep1)和非信号肽、跨膜结构组序列组(mep2)的各5条最优15肽表位,分别设计并合成其编码核苷酸,克隆到原核表达载体pET-28a(+)进行表达、纯化.结果 筛选到不同期别差异表达基因166条.表位预测后,总共筛选出40条最优混合表位,各期别各组5条.将童虫期目的基因mep1和mep2成功合成和克隆到了表达载体pET-28a(+),目的基因mep1表达量很高,而mep2未见表达,纯化得到mep1表达蛋白.结论 成功表达了串连抗原表位,为进一步分析其免疫原性、鉴定出有效表位做好了准备.
目的 錶達日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)轉錄本組中篩選穫得的候選抗原基因Th細胞錶位,以備免疫試驗驗證,為建立大規模、高通量、快速鑒定日本血吸蟲Th細胞錶位的方法奠定基礎.方法 應用數據挖掘技術,按照序列在不同期彆轉錄本的數量,從Feng Liu等公佈的轉錄本組EST序列中篩選齣期彆差異錶達基因,選擇具有完整可讀框的序列作為抗原候選基因,其所編碼蛋白按照有無信號肽和跨膜結構分為:信號肽跨膜結構組、非信號肽、跨膜結構組序列組.對編碼蛋白應用錶位預測服務器PRED-BALB/c、SYFPEIT、MHCPred、Rankpep分彆對I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek型MHC分子進行錶位預測.各期彆各組篩選齣5條最優混閤預測錶位.選擇童蟲期信號肽和跨膜結構組(mep1)和非信號肽、跨膜結構組序列組(mep2)的各5條最優15肽錶位,分彆設計併閤成其編碼覈苷痠,剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)進行錶達、純化.結果 篩選到不同期彆差異錶達基因166條.錶位預測後,總共篩選齣40條最優混閤錶位,各期彆各組5條.將童蟲期目的基因mep1和mep2成功閤成和剋隆到瞭錶達載體pET-28a(+),目的基因mep1錶達量很高,而mep2未見錶達,純化得到mep1錶達蛋白.結論 成功錶達瞭串連抗原錶位,為進一步分析其免疫原性、鑒定齣有效錶位做好瞭準備.
목적 표체일본혈흡충(Schistosoma japonicum)전록본조중사선획득적후선항원기인Th세포표위,이비면역시험험증,위건립대규모、고통량、쾌속감정일본혈흡충Th세포표위적방법전정기출.방법 응용수거알굴기술,안조서렬재불동기별전록본적수량,종Feng Liu등공포적전록본조EST서렬중사선출기별차이표체기인,선택구유완정가독광적서렬작위항원후선기인,기소편마단백안조유무신호태화과막결구분위:신호태과막결구조、비신호태、과막결구조서렬조.대편마단백응용표위예측복무기PRED-BALB/c、SYFPEIT、MHCPred、Rankpep분별대I-Ad、I-Ed、I-Ak、I-Ek형MHC분자진행표위예측.각기별각조사선출5조최우혼합예측표위.선택동충기신호태화과막결구조(mep1)화비신호태、과막결구조서렬조(mep2)적각5조최우15태표위,분별설계병합성기편마핵감산,극륭도원핵표체재체pET-28a(+)진행표체、순화.결과 사선도불동기별차이표체기인166조.표위예측후,총공사선출40조최우혼합표위,각기별각조5조.장동충기목적기인mep1화mep2성공합성화극륭도료표체재체pET-28a(+),목적기인mep1표체량흔고,이mep2미견표체,순화득도mep1표체단백.결론 성공표체료천련항원표위,위진일보분석기면역원성、감정출유효표위주호료준비.
