生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
6期
106-110
,共5页
柴化建%赵海泉%张丽君%罗焕亮
柴化建%趙海泉%張麗君%囉煥亮
시화건%조해천%장려군%라환량
植原体%免疫主导膜蛋白%原核表达
植原體%免疫主導膜蛋白%原覈錶達
식원체%면역주도막단백%원핵표체
旨在构建植原体免疫主导膜蛋白Imp基因原核表达载体,并进行初步表达.以重组克隆质粒pMD18-T-Imp为模板,PCR扩增Imp基因片段.构建表达载体pET-28a(+)-Imp,转化宿主菌E.coli BL21( DE3).筛选阳性克隆,提取重组质粒作PCR鉴定、酶切鉴定及IPTG诱导表达鉴定.PCR及双酶切结果显示,重组质粒pET-28a(+)-Imp构建成功.经IPTG诱导BL21( pET-28a(+)-Imp)表达约20kD的蛋白,与预期的携带6×His-Tag的目的蛋白(19.5 kD)大小相符,主要以包涵体形式存在.结果显示,构建的表达载体pET-28a(+)-Imp在E.coli BL21( DE3)中能够达一定量表达,为进一步纯化Imp蛋白奠定基础.
旨在構建植原體免疫主導膜蛋白Imp基因原覈錶達載體,併進行初步錶達.以重組剋隆質粒pMD18-T-Imp為模闆,PCR擴增Imp基因片段.構建錶達載體pET-28a(+)-Imp,轉化宿主菌E.coli BL21( DE3).篩選暘性剋隆,提取重組質粒作PCR鑒定、酶切鑒定及IPTG誘導錶達鑒定.PCR及雙酶切結果顯示,重組質粒pET-28a(+)-Imp構建成功.經IPTG誘導BL21( pET-28a(+)-Imp)錶達約20kD的蛋白,與預期的攜帶6×His-Tag的目的蛋白(19.5 kD)大小相符,主要以包涵體形式存在.結果顯示,構建的錶達載體pET-28a(+)-Imp在E.coli BL21( DE3)中能夠達一定量錶達,為進一步純化Imp蛋白奠定基礎.
지재구건식원체면역주도막단백Imp기인원핵표체재체,병진행초보표체.이중조극륭질립pMD18-T-Imp위모판,PCR확증Imp기인편단.구건표체재체pET-28a(+)-Imp,전화숙주균E.coli BL21( DE3).사선양성극륭,제취중조질립작PCR감정、매절감정급IPTG유도표체감정.PCR급쌍매절결과현시,중조질립pET-28a(+)-Imp구건성공.경IPTG유도BL21( pET-28a(+)-Imp)표체약20kD적단백,여예기적휴대6×His-Tag적목적단백(19.5 kD)대소상부,주요이포함체형식존재.결과현시,구건적표체재체pET-28a(+)-Imp재E.coli BL21( DE3)중능구체일정량표체,위진일보순화Imp단백전정기출.
