微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2007年
4期
673-676
,共4页
蔡昆%王慧%包士中%史晶%侯晓军%荫俊
蔡昆%王慧%包士中%史晶%侯曉軍%蔭俊
채곤%왕혜%포사중%사정%후효군%음준
狂犬病毒%单链二硫键稳定抗体%表达
狂犬病毒%單鏈二硫鍵穩定抗體%錶達
광견병독%단련이류건은정항체%표체
以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因.连接pET22b(+)载体,转化入E.coli BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达.体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性.结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白.荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高.这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料.
以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本單鏈抗體ScFv為模闆,利用PCR點突變分彆在重鏈FR可變區VH(44)和輕鏈FR可變區VL(100)分彆引入一箇半胱氨痠,成功構建瞭重組單鏈二硫鍵穩定抗體基因.連接pET22b(+)載體,轉化入E.coli BL21(DE3)得到工程菌,IPTG誘導錶達.體外複性併經Ni-NTA親和層析對目的蛋白ScdsFv進行純化;利用熒光抗體實驗和ELISA檢測抗體活性及穩定性.結果錶明重組ScdsFv蛋白實現瞭原覈高效錶達,通過體外複性和Ni-NTA柱純化穫得純度大于90%的ScdsFv蛋白.熒光抗體實驗和ELISA結果錶明ScdsFv具有特異的抗原結閤活性,與母本ScFv比較,穩定性有明顯提高.這種具有特異抗原結閤活性的穩定ScdsFv蛋白的穫得為其進一步的功能研究提供瞭材料.
이인원항광견병독당단백모본단련항체ScFv위모판,이용PCR점돌변분별재중련FR가변구VH(44)화경련FR가변구VL(100)분별인입일개반광안산,성공구건료중조단련이류건은정항체기인.련접pET22b(+)재체,전화입E.coli BL21(DE3)득도공정균,IPTG유도표체.체외복성병경Ni-NTA친화층석대목적단백ScdsFv진행순화;이용형광항체실험화ELISA검측항체활성급은정성.결과표명중조ScdsFv단백실현료원핵고효표체,통과체외복성화Ni-NTA주순화획득순도대우90%적ScdsFv단백.형광항체실험화ELISA결과표명ScdsFv구유특이적항원결합활성,여모본ScFv비교,은정성유명현제고.저충구유특이항원결합활성적은정ScdsFv단백적획득위기진일보적공능연구제공료재료.
