菌物学报
菌物學報
균물학보
MYCOSYSTEMA
2007年
3期
448-454
,共7页
秦文彦%程洁%应盛华%冯明光
秦文彥%程潔%應盛華%馮明光
진문언%정길%응성화%풍명광
黄曲霉毒素%曲霉%青霉%快速检测体系%反应条件优化%特异性%灵敏性
黃麯黴毒素%麯黴%青黴%快速檢測體繫%反應條件優化%特異性%靈敏性
황곡매독소%곡매%청매%쾌속검측체계%반응조건우화%특이성%령민성
根据黄曲霉毒素生化途径中的关键调控基因aflR、omt-1和ver-1的序列以及真菌共有的5.8S rDNA的ITS序列分别设计ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR及ITS1/ITS4四对引物,研究建立产黄曲霉毒素真菌及其潜在饲料或食品污染的多重PCR快速灵敏检测体系.PCR扩增的4个DNA片段中,1032bp、797bp和600bp与基因库中对应基因或DNA序列的同源性达99%以上,仅452bp片段与对应基因ver-1的同源性为98%.通过优化主要影响因子,建立了快速检测产黄曲霉毒素真菌的单管多重PCR反应体系,并用于6种曲霉和1种青霉DNA样品的检测.结果显示,上述4个片段均平行地清晰出现在2株黄曲霉Aspergillus flavus和1株寄生曲霉A.parasiticus的DNA样品中,而其余菌种只检测到ITS片段,说明检测特异性很好.灵敏性分析表明,多重PCR检测的保守灵敏度为1ng/μL样品DNA,所有目标片段的条带均很清晰;即使DNA浓度降至0.1ng/μL,除aflR之外的所有条带也可分辨.
根據黃麯黴毒素生化途徑中的關鍵調控基因aflR、omt-1和ver-1的序列以及真菌共有的5.8S rDNA的ITS序列分彆設計ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR及ITS1/ITS4四對引物,研究建立產黃麯黴毒素真菌及其潛在飼料或食品汙染的多重PCR快速靈敏檢測體繫.PCR擴增的4箇DNA片段中,1032bp、797bp和600bp與基因庫中對應基因或DNA序列的同源性達99%以上,僅452bp片段與對應基因ver-1的同源性為98%.通過優化主要影響因子,建立瞭快速檢測產黃麯黴毒素真菌的單管多重PCR反應體繫,併用于6種麯黴和1種青黴DNA樣品的檢測.結果顯示,上述4箇片段均平行地清晰齣現在2株黃麯黴Aspergillus flavus和1株寄生麯黴A.parasiticus的DNA樣品中,而其餘菌種隻檢測到ITS片段,說明檢測特異性很好.靈敏性分析錶明,多重PCR檢測的保守靈敏度為1ng/μL樣品DNA,所有目標片段的條帶均很清晰;即使DNA濃度降至0.1ng/μL,除aflR之外的所有條帶也可分辨.
근거황곡매독소생화도경중적관건조공기인aflR、omt-1화ver-1적서렬이급진균공유적5.8S rDNA적ITS서렬분별설계ApaF/ApaR、OmtF/OmtR、VerF/VerR급ITS1/ITS4사대인물,연구건립산황곡매독소진균급기잠재사료혹식품오염적다중PCR쾌속령민검측체계.PCR확증적4개DNA편단중,1032bp、797bp화600bp여기인고중대응기인혹DNA서렬적동원성체99%이상,부452bp편단여대응기인ver-1적동원성위98%.통과우화주요영향인자,건립료쾌속검측산황곡매독소진균적단관다중PCR반응체계,병용우6충곡매화1충청매DNA양품적검측.결과현시,상술4개편단균평행지청석출현재2주황곡매Aspergillus flavus화1주기생곡매A.parasiticus적DNA양품중,이기여균충지검측도ITS편단,설명검측특이성흔호.령민성분석표명,다중PCR검측적보수령민도위1ng/μL양품DNA,소유목표편단적조대균흔청석;즉사DNA농도강지0.1ng/μL,제aflR지외적소유조대야가분변.
