目的:自发性脑内出血发病率高,现代医学不论是外科治疗还是内科治疗效果均不理想.由于血肿形成后的原发性组织损害已无法恢复,继发性的脑损害预防才是治疗的关键.近期对继发性脑损害的研究重点集中在:血肿周围脑组织血流及代谢改变及其调控因素,继发性脑水肿的发生机制,早期血肿扩大的原理和预防,铁离子超载理论的临床证实及治疗,兴奋性氨基酸理论等方面,并取得了很大的进展.但关于脑保护的实验室工作和临床实践不多,应用于临床的成熟技术、方法更少.安宫牛黄丸主治"瘟毒热盛,神昏谵语,狂躁不安,痰浊内闭痉厥抽动,不省人事",所以具有清热解毒、豁痰开窍的功效,主治热病,邪入心包、高热惊厥、神昏谵语;安宫牛黄丸针对病人高烧、神志昏迷、烦躁而乱语及惊厥抽搐等症,属中医临床治疗急症之要药.广泛应用于临床治疗脑血管疾病,但机制不详,本文对大鼠脑出血模型氨基酸变化和超微结构的改变加以研究.方法:成年雄性SD大鼠75只,正常对照组(SD)5只,假手术组(NO)10只,模型组(N)20只,全方组 (A)20只,简方组(a)20只;除正常对照组外,试验大鼠均以北京同仁堂制药厂提供的安宫牛黄丸粉剂预处理;安宫牛黄丸分全方和简方两种,简方缺少朱砂和雄黄;灌胃一周,每日一次,最后一次灌胃后两小时造模;造模采用尾动脉切开取血法,用微量注射器在立体定向仪下缓慢(5min)注入右侧内囊(中线旁3mm,前囟前0.5mm,深5mm) 100μl自体非抗凝血,留针10min,制成ICH大鼠模型.造模成功后4h、24h处死取脑,采用不同方法检测血肿边缘脑组织损害性改变.①氨基酸测定:冰盒上操作,取血肿周边1mm脑组织100mg(必须＞80mg,无血,位置一致,快速),电子天平精确称重,分别放入离心管中,标记后迅速置液氮罐中快速冷冻,后置-70℃冰箱保存,成批检测.采用高效液相色谱分析法(high performance liquid chromatograph,HPLC)检测不同实验组动物血肿周边脑组织兴奋性氨基酸( excit atoryamino acids, EAA) 谷氨酸( glutamic acid, Glu) 和天冬氨酸( aspartic acid, Asp)以及抑制性氨基酸甘氨酸(glycine acid, Gly)、λ-氨基丁酸(λ-aminobutyric acid, GABA)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)的变化规律.②电镜观察:取血肿周围脑组织,切分为1mm3置于盛有4%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液中固定2h;PBS液冲洗3次,每次10min,环氧树脂包埋,超薄切片铅铀染色.切片片厚50nm,组织经锇化,梯度酒精脱水,Epon812包埋,LKB超薄切片,经醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,EM208s型透射电镜观察照相.观察神经细胞及细胞器形态、血管形态、髓鞘改变等超微结构.按相同放大倍数摄片.结果:氨基酸变化:①与对照组相比,模型组4h及24h标本内兴奋性氨基酸Glu、Asp以及抑制性氨基酸GABA增高有显著性意义,且差异十分显著;抑制性氨基酸Gln在假手术组增高有显著性意义(P＜0.01);Gly变化不明显.②在4h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组兴奋性氨基酸及抑制性氨基酸均变化不显著.③在24h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义,抑制性氨基酸Gln增高有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组仅兴奋性氨基酸Glu下降有显著性意义(P＜0.01).超微结构变化:在双盲状态下,分组观察,半薄切片观察组织病理形态,超薄切片观察细胞器、血脑屏障、神经纤维丝的变化.①模型组造模后4h即已出现较假手术组明显的神经细胞、血管损伤性变化.②假手术组、模型组、简方组造模后4h、24h均出现严重血管损伤,致管腔变形狭窄.③全方组在造模后4h、24h均表现为神经元、胶质细胞核膜完整清晰,无水肿,细胞器结构正常;血管周边轻度水肿,可见部分内皮细胞核增大.④全组标本神经纤维未见明显损伤.结论:①安宫牛黄丸全方可能通过影响兴奋性氨基酸的表达实现脑组织继发性损害的保护作用.②安宫牛黄丸全方干预的大鼠自发性脑出血后脑损害轻微.③安宫牛黄丸简方效果不明显.
目的:自髮性腦內齣血髮病率高,現代醫學不論是外科治療還是內科治療效果均不理想.由于血腫形成後的原髮性組織損害已無法恢複,繼髮性的腦損害預防纔是治療的關鍵.近期對繼髮性腦損害的研究重點集中在:血腫週圍腦組織血流及代謝改變及其調控因素,繼髮性腦水腫的髮生機製,早期血腫擴大的原理和預防,鐵離子超載理論的臨床證實及治療,興奮性氨基痠理論等方麵,併取得瞭很大的進展.但關于腦保護的實驗室工作和臨床實踐不多,應用于臨床的成熟技術、方法更少.安宮牛黃汍主治"瘟毒熱盛,神昏譫語,狂躁不安,痰濁內閉痙厥抽動,不省人事",所以具有清熱解毒、豁痰開纖的功效,主治熱病,邪入心包、高熱驚厥、神昏譫語;安宮牛黃汍針對病人高燒、神誌昏迷、煩躁而亂語及驚厥抽搐等癥,屬中醫臨床治療急癥之要藥.廣汎應用于臨床治療腦血管疾病,但機製不詳,本文對大鼠腦齣血模型氨基痠變化和超微結構的改變加以研究.方法:成年雄性SD大鼠75隻,正常對照組(SD)5隻,假手術組(NO)10隻,模型組(N)20隻,全方組 (A)20隻,簡方組(a)20隻;除正常對照組外,試驗大鼠均以北京同仁堂製藥廠提供的安宮牛黃汍粉劑預處理;安宮牛黃汍分全方和簡方兩種,簡方缺少硃砂和雄黃;灌胃一週,每日一次,最後一次灌胃後兩小時造模;造模採用尾動脈切開取血法,用微量註射器在立體定嚮儀下緩慢(5min)註入右側內囊(中線徬3mm,前囟前0.5mm,深5mm) 100μl自體非抗凝血,留針10min,製成ICH大鼠模型.造模成功後4h、24h處死取腦,採用不同方法檢測血腫邊緣腦組織損害性改變.①氨基痠測定:冰盒上操作,取血腫週邊1mm腦組織100mg(必鬚＞80mg,無血,位置一緻,快速),電子天平精確稱重,分彆放入離心管中,標記後迅速置液氮罐中快速冷凍,後置-70℃冰箱保存,成批檢測.採用高效液相色譜分析法(high performance liquid chromatograph,HPLC)檢測不同實驗組動物血腫週邊腦組織興奮性氨基痠( excit atoryamino acids, EAA) 穀氨痠( glutamic acid, Glu) 和天鼕氨痠( aspartic acid, Asp)以及抑製性氨基痠甘氨痠(glycine acid, Gly)、λ-氨基丁痠(λ-aminobutyric acid, GABA)、穀氨酰胺(Glutamine,Gln)的變化規律.②電鏡觀察:取血腫週圍腦組織,切分為1mm3置于盛有4%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液中固定2h;PBS液遲洗3次,每次10min,環氧樹脂包埋,超薄切片鉛鈾染色.切片片厚50nm,組織經鋨化,梯度酒精脫水,Epon812包埋,LKB超薄切片,經醋痠鈾-枸櫞痠鉛雙重染色,EM208s型透射電鏡觀察照相.觀察神經細胞及細胞器形態、血管形態、髓鞘改變等超微結構.按相同放大倍數攝片.結果:氨基痠變化:①與對照組相比,模型組4h及24h標本內興奮性氨基痠Glu、Asp以及抑製性氨基痠GABA增高有顯著性意義,且差異十分顯著;抑製性氨基痠Gln在假手術組增高有顯著性意義(P＜0.01);Gly變化不明顯.②在4h標本中,與模型組相比,全方祖內興奮性氨基痠Glu、Asp下降有顯著性意義(P＜0.01);GABA、Gly變化不明顯.簡方組興奮性氨基痠及抑製性氨基痠均變化不顯著.③在24h標本中,與模型組相比,全方祖內興奮性氨基痠Glu、Asp下降有顯著性意義,抑製性氨基痠Gln增高有顯著性意義(P＜0.01);GABA、Gly變化不明顯.簡方組僅興奮性氨基痠Glu下降有顯著性意義(P＜0.01).超微結構變化:在雙盲狀態下,分組觀察,半薄切片觀察組織病理形態,超薄切片觀察細胞器、血腦屏障、神經纖維絲的變化.①模型組造模後4h即已齣現較假手術組明顯的神經細胞、血管損傷性變化.②假手術組、模型組、簡方組造模後4h、24h均齣現嚴重血管損傷,緻管腔變形狹窄.③全方組在造模後4h、24h均錶現為神經元、膠質細胞覈膜完整清晰,無水腫,細胞器結構正常;血管週邊輕度水腫,可見部分內皮細胞覈增大.④全組標本神經纖維未見明顯損傷.結論:①安宮牛黃汍全方可能通過影響興奮性氨基痠的錶達實現腦組織繼髮性損害的保護作用.②安宮牛黃汍全方榦預的大鼠自髮性腦齣血後腦損害輕微.③安宮牛黃汍簡方效果不明顯.
목적:자발성뇌내출혈발병솔고,현대의학불론시외과치료환시내과치료효과균불이상.유우혈종형성후적원발성조직손해이무법회복,계발성적뇌손해예방재시치료적관건.근기대계발성뇌손해적연구중점집중재:혈종주위뇌조직혈류급대사개변급기조공인소,계발성뇌수종적발생궤제,조기혈종확대적원리화예방,철리자초재이론적림상증실급치료,흥강성안기산이론등방면,병취득료흔대적진전.단관우뇌보호적실험실공작화림상실천불다,응용우림상적성숙기술、방법경소.안궁우황환주치"온독열성,신혼섬어,광조불안,담탁내폐경궐추동,불성인사",소이구유청열해독、활담개규적공효,주치열병,사입심포、고열량궐、신혼섬어;안궁우황환침대병인고소、신지혼미、번조이란어급량궐추휵등증,속중의림상치료급증지요약.엄범응용우림상치료뇌혈관질병,단궤제불상,본문대대서뇌출혈모형안기산변화화초미결구적개변가이연구.방법:성년웅성SD대서75지,정상대조조(SD)5지,가수술조(NO)10지,모형조(N)20지,전방조 (A)20지,간방조(a)20지;제정상대조조외,시험대서균이북경동인당제약엄제공적안궁우황환분제예처리;안궁우황환분전방화간방량충,간방결소주사화웅황;관위일주,매일일차,최후일차관위후량소시조모;조모채용미동맥절개취혈법,용미량주사기재입체정향의하완만(5min)주입우측내낭(중선방3mm,전신전0.5mm,심5mm) 100μl자체비항응혈,류침10min,제성ICH대서모형.조모성공후4h、24h처사취뇌,채용불동방법검측혈종변연뇌조직손해성개변.①안기산측정:빙합상조작,취혈종주변1mm뇌조직100mg(필수＞80mg,무혈,위치일치,쾌속),전자천평정학칭중,분별방입리심관중,표기후신속치액담관중쾌속냉동,후치-70℃빙상보존,성비검측.채용고효액상색보분석법(high performance liquid chromatograph,HPLC)검측불동실험조동물혈종주변뇌조직흥강성안기산( excit atoryamino acids, EAA) 곡안산( glutamic acid, Glu) 화천동안산( aspartic acid, Asp)이급억제성안기산감안산(glycine acid, Gly)、λ-안기정산(λ-aminobutyric acid, GABA)、곡안선알(Glutamine,Gln)적변화규률.②전경관찰:취혈종주위뇌조직,절분위1mm3치우성유4%다취갑철-2.5%무이철고정액중고정2h;PBS액충세3차,매차10min,배양수지포매,초박절편연유염색.절편편후50nm,조직경철화,제도주정탈수,Epon812포매,LKB초박절편,경작산유-구연산연쌍중염색,EM208s형투사전경관찰조상.관찰신경세포급세포기형태、혈관형태、수초개변등초미결구.안상동방대배수섭편.결과:안기산변화:①여대조조상비,모형조4h급24h표본내흥강성안기산Glu、Asp이급억제성안기산GABA증고유현저성의의,차차이십분현저;억제성안기산Gln재가수술조증고유현저성의의(P＜0.01);Gly변화불명현.②재4h표본중,여모형조상비,전방조내흥강성안기산Glu、Asp하강유현저성의의(P＜0.01);GABA、Gly변화불명현.간방조흥강성안기산급억제성안기산균변화불현저.③재24h표본중,여모형조상비,전방조내흥강성안기산Glu、Asp하강유현저성의의,억제성안기산Gln증고유현저성의의(P＜0.01);GABA、Gly변화불명현.간방조부흥강성안기산Glu하강유현저성의의(P＜0.01).초미결구변화:재쌍맹상태하,분조관찰,반박절편관찰조직병리형태,초박절편관찰세포기、혈뇌병장、신경섬유사적변화.①모형조조모후4h즉이출현교가수술조명현적신경세포、혈관손상성변화.②가수술조、모형조、간방조조모후4h、24h균출현엄중혈관손상,치관강변형협착.③전방조재조모후4h、24h균표현위신경원、효질세포핵막완정청석,무수종,세포기결구정상;혈관주변경도수종,가견부분내피세포핵증대.④전조표본신경섬유미견명현손상.결론:①안궁우황환전방가능통과영향흥강성안기산적표체실현뇌조직계발성손해적보호작용.②안궁우황환전방간예적대서자발성뇌출혈후뇌손해경미.③안궁우황환간방효과불명현.
