目的:模拟体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1接触方式,研究核心蛋白多糖在固相抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用.方法:实验于2005-01/09在广州市创伤研究所完成.①实验成纤维细胞的组织来源:取材于广州市红十字会医院,患者自愿,正常皮肤为包皮.取新鲜包皮,修除表皮和皮下组织,加入含体积分数0.02的胎牛血清的DMEM培养,实验用第4～8代细胞.②采用醋酸法从鼠尾腱中提取Ⅰ型胶原,使用浓度为2g/L,网格胶原终浓度为1g/L,成纤维细胞密度为1×109L-1.将胶原细胞混悬液按2 mL/皿均匀加入直径35 mm的培养皿内,37℃培养10 min,混悬液便形成凝胶即成纤维细胞胶原网格,再加入相应的培养液.分为4组:对照组、核心蛋白多糖组、转化生长因子β1组、转化生长因子β1+核心蛋白多糖组.③观察成纤维细胞胶原网格的收缩,Westem blot法检测成纤维细胞胶原网格中成纤维细胞纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达.结果:①成纤维细胞胶原网格收缩的变化:对照组成纤维细胞胶原网格培养12 h,收缩到起始面积的(81.2±4.9)%,12～24 h收缩加剧,在24 h收缩到起始面积的(47.4±4.7)%,以后收缩减慢,在48 h收缩到起始面积的(37.3±3.6)%,72 h收缩到起始面积的(29.6±3.6)%,96 h收缩到起始面积的(28.7±2.8)%,以后不再收缩;核心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在12,24,48,72,96 h均高于对照组(P＜0.05);转化生长因子β1组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均低于对照组(P＜0.01);转化生长因子β1+核心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均高于转化生长因子β1组(P＜0.05),与对照组比较无显著差异(P＞0.05).②成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的变化:核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(1 391.61±126.27,525.97±60.10),与对照组(1474.52±133.84,569.41±62.55)比较无显著差异(P＞0.05),转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(2909.77±264.04,2 725.46±150.54)显著高于对照组(P＜0.01),转化生长因子β1+核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(1 775.25±161.09,926.34±51.16)显著低于转化生长因子β1组(P＜0.05),且与对照组比较无显著差异(P＞0.05).③成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的变化:核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.19±0.05,0.07±0.02),与对照组(0.21±0.06,0.08±0.03)比较无显著差异(P＞0.05),转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.86±0.15,0.36±0.10)显著高于对照组(P＜0.01),转化生长因子β1+核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.34±0.09,0.13±0.04)显著低于转化生长因子β1组(P＜0.05),且与对照组比较无显著差异(P＞0.05). 结论:重组核心蛋白多糖融入胶原凝胶,能显著抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用,表明在体内核心蛋白多糖具有拮抗转化生长因子β1的作用.
目的:模擬體內覈心蛋白多糖和轉化生長因子β1接觸方式,研究覈心蛋白多糖在固相抑製轉化生長因子β1刺激正常皮膚成纖維細胞的作用.方法:實驗于2005-01/09在廣州市創傷研究所完成.①實驗成纖維細胞的組織來源:取材于廣州市紅十字會醫院,患者自願,正常皮膚為包皮.取新鮮包皮,脩除錶皮和皮下組織,加入含體積分數0.02的胎牛血清的DMEM培養,實驗用第4～8代細胞.②採用醋痠法從鼠尾腱中提取Ⅰ型膠原,使用濃度為2g/L,網格膠原終濃度為1g/L,成纖維細胞密度為1×109L-1.將膠原細胞混懸液按2 mL/皿均勻加入直徑35 mm的培養皿內,37℃培養10 min,混懸液便形成凝膠即成纖維細胞膠原網格,再加入相應的培養液.分為4組:對照組、覈心蛋白多糖組、轉化生長因子β1組、轉化生長因子β1+覈心蛋白多糖組.③觀察成纖維細胞膠原網格的收縮,Westem blot法檢測成纖維細胞膠原網格中成纖維細胞纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白的錶達,反轉錄-聚閤酶鏈反應檢測其mRNA錶達.結果:①成纖維細胞膠原網格收縮的變化:對照組成纖維細胞膠原網格培養12 h,收縮到起始麵積的(81.2±4.9)%,12～24 h收縮加劇,在24 h收縮到起始麵積的(47.4±4.7)%,以後收縮減慢,在48 h收縮到起始麵積的(37.3±3.6)%,72 h收縮到起始麵積的(29.6±3.6)%,96 h收縮到起始麵積的(28.7±2.8)%,以後不再收縮;覈心蛋白多糖組成纖維細胞膠原網格收縮到起始麵積的百分比在12,24,48,72,96 h均高于對照組(P＜0.05);轉化生長因子β1組成纖維細胞膠原網格收縮到起始麵積的百分比在各時相點均低于對照組(P＜0.01);轉化生長因子β1+覈心蛋白多糖組成纖維細胞膠原網格收縮到起始麵積的百分比在各時相點均高于轉化生長因子β1組(P＜0.05),與對照組比較無顯著差異(P＞0.05).②成纖維細胞膠原網格中細胞錶達纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白的變化:覈心蛋白多糖組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白蛋白錶達(1 391.61±126.27,525.97±60.10),與對照組(1474.52±133.84,569.41±62.55)比較無顯著差異(P＞0.05),轉化生長因子β1組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白蛋白錶達(2909.77±264.04,2 725.46±150.54)顯著高于對照組(P＜0.01),轉化生長因子β1+覈心蛋白多糖組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白蛋白錶達(1 775.25±161.09,926.34±51.16)顯著低于轉化生長因子β1組(P＜0.05),且與對照組比較無顯著差異(P＞0.05).③成纖維細胞膠原網格中細胞錶達纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白mRNA的變化:覈心蛋白多糖組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白mRNA錶達(0.19±0.05,0.07±0.02),與對照組(0.21±0.06,0.08±0.03)比較無顯著差異(P＞0.05),轉化生長因子β1組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白mRNA錶達(0.86±0.15,0.36±0.10)顯著高于對照組(P＜0.01),轉化生長因子β1+覈心蛋白多糖組纖溶酶原激活物抑製物-1、α-平滑肌肌動蛋白mRNA錶達(0.34±0.09,0.13±0.04)顯著低于轉化生長因子β1組(P＜0.05),且與對照組比較無顯著差異(P＞0.05). 結論:重組覈心蛋白多糖融入膠原凝膠,能顯著抑製轉化生長因子β1刺激正常皮膚成纖維細胞的作用,錶明在體內覈心蛋白多糖具有拮抗轉化生長因子β1的作用.
목적:모의체내핵심단백다당화전화생장인자β1접촉방식,연구핵심단백다당재고상억제전화생장인자β1자격정상피부성섬유세포적작용.방법:실험우2005-01/09재엄주시창상연구소완성.①실험성섬유세포적조직래원:취재우엄주시홍십자회의원,환자자원,정상피부위포피.취신선포피,수제표피화피하조직,가입함체적분수0.02적태우혈청적DMEM배양,실험용제4～8대세포.②채용작산법종서미건중제취Ⅰ형효원,사용농도위2g/L,망격효원종농도위1g/L,성섬유세포밀도위1×109L-1.장효원세포혼현액안2 mL/명균균가입직경35 mm적배양명내,37℃배양10 min,혼현액편형성응효즉성섬유세포효원망격,재가입상응적배양액.분위4조:대조조、핵심단백다당조、전화생장인자β1조、전화생장인자β1+핵심단백다당조.③관찰성섬유세포효원망격적수축,Westem blot법검측성섬유세포효원망격중성섬유세포섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백적표체,반전록-취합매련반응검측기mRNA표체.결과:①성섬유세포효원망격수축적변화:대조조성섬유세포효원망격배양12 h,수축도기시면적적(81.2±4.9)%,12～24 h수축가극,재24 h수축도기시면적적(47.4±4.7)%,이후수축감만,재48 h수축도기시면적적(37.3±3.6)%,72 h수축도기시면적적(29.6±3.6)%,96 h수축도기시면적적(28.7±2.8)%,이후불재수축;핵심단백다당조성섬유세포효원망격수축도기시면적적백분비재12,24,48,72,96 h균고우대조조(P＜0.05);전화생장인자β1조성섬유세포효원망격수축도기시면적적백분비재각시상점균저우대조조(P＜0.01);전화생장인자β1+핵심단백다당조성섬유세포효원망격수축도기시면적적백분비재각시상점균고우전화생장인자β1조(P＜0.05),여대조조비교무현저차이(P＞0.05).②성섬유세포효원망격중세포표체섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백적변화:핵심단백다당조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백단백표체(1 391.61±126.27,525.97±60.10),여대조조(1474.52±133.84,569.41±62.55)비교무현저차이(P＞0.05),전화생장인자β1조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백단백표체(2909.77±264.04,2 725.46±150.54)현저고우대조조(P＜0.01),전화생장인자β1+핵심단백다당조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백단백표체(1 775.25±161.09,926.34±51.16)현저저우전화생장인자β1조(P＜0.05),차여대조조비교무현저차이(P＞0.05).③성섬유세포효원망격중세포표체섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백mRNA적변화:핵심단백다당조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백mRNA표체(0.19±0.05,0.07±0.02),여대조조(0.21±0.06,0.08±0.03)비교무현저차이(P＞0.05),전화생장인자β1조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백mRNA표체(0.86±0.15,0.36±0.10)현저고우대조조(P＜0.01),전화생장인자β1+핵심단백다당조섬용매원격활물억제물-1、α-평활기기동단백mRNA표체(0.34±0.09,0.13±0.04)현저저우전화생장인자β1조(P＜0.05),차여대조조비교무현저차이(P＞0.05). 결론:중조핵심단백다당융입효원응효,능현저억제전화생장인자β1자격정상피부성섬유세포적작용,표명재체내핵심단백다당구유길항전화생장인자β1적작용.
