中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2006年
6期
449-453
,共5页
蔡月琴%叶菊秀%李玲燕%周继勇
蔡月琴%葉菊秀%李玲燕%週繼勇
채월금%협국수%리령연%주계용
狂犬病病毒%糖蛋白膜外区%高效表达
狂犬病病毒%糖蛋白膜外區%高效錶達
광견병병독%당단백막외구%고효표체
为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒.将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45.4%.经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性.
為穫得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,採用RT-PCR方法從狂犬病病毒ERA株中擴增瞭編碼RV糖蛋白的全長基因,將其剋隆于pMD18-T載體,再經PCR擴增齣糖蛋白全長基因和膜外區基因,將其分彆亞剋隆至原覈錶達載體pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,經PCR和雙酶切鑒定以及序列分析,錶明已成功構建瞭重組質粒.將重組質粒轉化到大腸埃希氏菌BL21(DE3)中進行錶達,結果顯示,剋隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外區基因錶達量最高,目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白的45.4%.經Western-blotting檢測,不同載體錶達的糖蛋白膜外區產物均可與兔抗RV多抗髮生特異性反應,錶明,重組蛋白具有良好的反應原性.
위획득광견병병독(RV)당단백항원,채용RT-PCR방법종광견병병독ERA주중확증료편마RV당단백적전장기인,장기극륭우pMD18-T재체,재경PCR확증출당단백전장기인화막외구기인,장기분별아극륭지원핵표체재체pET-28a(+)、pET-32a(+)화pGEX-4T-1중,경PCR화쌍매절감정이급서렬분석,표명이성공구건료중조질립.장중조질립전화도대장애희씨균BL21(DE3)중진행표체,결과현시,극륭도pET-32a(+)적당단백막외구기인표체량최고,목적단백표체량점균체총단백적45.4%.경Western-blotting검측,불동재체표체적당단백막외구산물균가여토항RV다항발생특이성반응,표명,중조단백구유량호적반응원성.
